分子生物学研究策略-印记基因.ppt

分子生物学研究策略Research Strategy on Molecular Biology2010. 9 第二部分 基因组印记与印记基因 基因治疗 一、基因组印记与印记基因 基因组印记(genomic imprinting)是一种不遵循孟德尔遗传规律的亲本等位基因差异表达现象，即DNA甲基化修饰通过启动子附近差异甲基化区域控制等位基因的不对称表达。基因组印记可以是共价标记（DNA甲基化）上的，也可以是非共价标记（DNA-蛋白质和DNA-RNA互作，核基因组定位）。 不对称表达的基因称为印记基因(imprinting gene)，如母系印记、父系表达的Igf2 (insulin-like growth factor 2)和父系印记、母系表达的H19。已证实的人类印记基因有51个，小鼠印记基因有82个。配子发生和早期胚胎形成过程中，基因组印记经历了擦除和重建，并在此后的生命过程中维持印记，其中任何一个环节出现错误都可能导致胚胎发育缺陷，甚至死亡。 印记基因的特点： ①性别特异性，同一等位基因仅表达父本或母本基因。 ②印记发生于配子形成过程中。 ③在胚胎的有丝分裂中能稳定传递给子细胞。 ④遗传给下一代时印记被重塑，建立新的与性别有关的印记。 印记的重组包括印记的擦除与重建，主要发生在配子的迁移和成熟过程。基因印记的完整性是原始生殖细胞(primordialgermcell，PGC)细胞核具有全能性的重要前提，同时也是配子成熟过程的必需步骤。 印记的擦除发生于PGC（原生殖细胞）向生殖嵴迁移的过程中，而且在生殖细胞的分化过程中起到重要作用。 基因组印记的建立是生殖细胞成熟过程中的重要事件，而且这一时间段是印记建立的特异时间窗，即印记基因甲基化的获得只特异性发生于配子形成过程。雌、雄两性的配子分化、发育过程存在显著差异，印记的建立在雌、雄两性之间也存在显著的差异。 雌性配子的印记重建 雌性生殖细胞的成熟过程中，擦除的基因组印记又逐步重新建立起来。在幼鼠和成年鼠的研究中发现，卵母细胞基因组印记的建立与卵母细胞的直径有关，与年龄无关。卵母细胞基因印记的建立大约起始于直径达到40?m，到达65?m时甲基化基本完成。 雄性配子的印记重建 雄性生殖细胞基因组印记的建立早于雌性，而且印记完成的过程比较漫长，主要发生在减数分裂之前的精原细胞阶段。 父源印记的建立与胚胎生殖细胞的分化发育存在密切关系。临床常规精液分析诊断为中、重度精子减少的患者其精子的基因印记错误率高于正常精子。 印记基因的“印记”机理是呈印记一方的基因调控序列DNA(一般为启动子)被甲基化(methylation)、组蛋白被乙酰基化(histone acetylation)和组蛋白被甲基化, 其中DNA 甲基化是其关键。 基因印记的建立和维持依靠DNA甲基转移酶(DNA methylation transferase，DNMT)的参与，DNMT的缺失或功能异常导致的印记异常会严重阻碍正常的胚胎发育。 对印记基因研究显示，来源于父母双方的等位基因甲基化程度不同，这一区域称为DMRs (Differentially Methylated Regions)，也有称为ICR （Imprinting control region）。 哺乳动物的DNMT家族主要成员: Dnmtl、Dnmt3a、Dnmt3b和Dnmt3L等。 Dnmt l是哺乳动物最主要的甲基转移酶，表达于复制状态的增殖细胞，能够优先催化复制后半甲基化的DNA双链，使低甲基化的子链完全甲基化。在甲基化的维持中具有重要作用。 Dnmt 3a和Dnmt 3b作用于未甲基化的DNA双链，两者在催化功能上相互补充。Dnmt3a优先使核小体之外裸露部分的DNA甲基化，而Dnmt3b使核心区甲基化。 Dnmt 3L (DNA methyltransferase3一likeprotein)在PHD锌指区域与Dnmt3a和Dnmt3b有同源性，但缺乏高度保守的转移酶基序，因此没有催化活性，但Dnmt3L可以直接刺激Dnmt3a和Dnmt3b的DNA甲基化活性而发挥功能。 组蛋白是真核生物染色体的基本结构蛋白，是一类小分子碱性蛋白质，其富含精氨酸和赖氨酸等碱性氨基酸，并且两种氨基酸大概占所有氨基酸残基的1/4，组蛋白因带有碱性氨基酸而带正电与带负电的双螺旋DNA组成DNA-组蛋白复合物。组蛋白分为H1，H2A，H2B，H3和H4等5种成分，除H1之外其他的4种组蛋白以二聚体（共八聚体）相结合，形成核小体核心，DNA缠绕其上由H1连接构成念珠状的核小体结构。 组蛋白有两个活性末端: 羧基端和氨基端。羧基端与组蛋白分子间的相互作用和D