细胞因子、抗体检测技术.ppt

感谢您的浏览 有需要的相关抗体可以在Fantibody全球抗体搜索引擎进行咨询 全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台，由探生科技建立并维护。 网址：/ Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家! 三、基本操作注意事项 （一）加样: 在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。 （二）孵育 ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃（冰箱温度）等。37℃是实验室中常用的孵育温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。 （三）洗涤 洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。 ELISA洗涤：达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。 可以说在ELISA操作中，洗涤是最主要的关键技术。 四、实验中常出现的问题 1. ELISA出现“一片黄”的原因： ⑴酶结合物浓度过高 ⑵底物不新鲜 ⑶洗涤不干净 2.ELISA出现“一片白”的原因： ⑴载体吸附性能差 ⑵底物错 ⑶稀释液作包被液 ⑷加错试剂 ⑸包被时间过短 ⑹酶活力低或下降 ⑺样品含有NaN3。 间接ELISA法操作步骤 1.样本的收集； 2.包被抗原； 3.封闭； 4.加稀释的待检样品； 5.加酶标抗抗体； 6.加底物显色； 7.终止反应。 样本收集 包被抗原 封 闭 加入待检样品，10min 洗涤3次 加入酶标二抗，10min 洗涤3次 洗涤3次 加入显色液3、4液各一滴 洗涤8次 已完成 未完成 细胞因子、抗体检测技术 背景知识 研究细胞因子对阐明机体免疫应答及其调节机制、免疫相关疾病的发生、发展规律和指导临床治疗均具有重要意义。 抗体具有高特异性、高亲和力等特点，目前已广泛应用于免疫学、微生物学、肿瘤学、遗传学以及分子生物学等各个领域。 细胞因子的检测方法： 1) 生物学方法 ①依赖性细胞株 ：生物分析法 ②功能检测 ：生物分析法 2) 分子生物学方法 ①分子杂交技术 ：mRNA的测定 ②多聚酶链反应技术（PCR）：mRNA的测定 3）免疫学方法 ①免疫测定 ：免疫酶技术 ②功能测定与抗体抑制 抗体检测技术 1）免疫酶技术 2）免疫荧光技术 3）间接血凝试验 4）放射免疫测定 5）蛋白印迹 6）免疫共沉淀 酶联免疫吸附测定(ELISA)Enzyme linked immunosorbent assay ? 该试剂盒是基于NP30抗独特型抗体可替代虫源性?抗原的特性研制而成的。在国内、外均属率先应用生?物技术制备抗原代替传统虫源抗原。已证实NP30检测?的血吸虫抗体属短程抗体，治疗后阴转较快，具有疗?效考核价值。????? 该试剂盒的诊断效能多项指标均已达到或超过经?典抗体检测法，较以前病原学检查和免疫学检测方法?更为简便快速。仅用一滴血，20分钟即可判读结果，?不需其他仪器设备，便于在基层、现场使用。本试剂?盒已在血吸虫流行区已应用近120万人次。 实验原理 酶联免疫吸附测定是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫技术，此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速，因其具有微量、特异、高效、经济、方便和安全等特点，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 实验原理 ELISA利用了免疫反应的高度特异性和酶促反应的高度敏感性检测抗原或抗体。 1、使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 2、使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 3、按一定步骤进行抗原抗体反应。 4、加底物显色，根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。 方法类型 ELISA既可测抗原又可测抗体，根据试剂来源、标本性状以及检测的具体条件，可设