实验五 转基因植物的RT-PCR检测.pptVIP

1、检测外源基因在植物细胞中的转录，对外源基因表达调控进行研究，掌握引物的选择、cDNA的合成、RT-PCR检测的原理与方法。 。 1、材料： 转基因植物的RNA或mRNA制备物。 非转化的植株材料总RNA或mRNA制备物 2、设备：PCR仪、移液器、PCR管等。 3、试剂：10×RT缓冲液、dNTP、逆转录酶、 引物（随机引物，Oligo dT; 特异引物)、 10×One Step RNA PCR Buffer、25 mM MgCl2、10 mM dNTP、RNase Inhibitor (40 U/μl)、AMV-Optimized Taq1 μl、AMV RTase XL (5 U/μl)、上游特异Primer (20 μM)*1、下游特异Primer (20 μM)*2、RNase Free H2O。 反应条件： 42 ℃ 30min 99 ℃ 5min 5 ℃ 5min 反应条件： 94℃ 2min 94 ℃ 30s 55 ℃ 30s 72 ℃ 1min 72 ℃ 7min 结果与分析 利用凝胶成像分析仪对电泳结果进行拍照和结果记录； 观察胶上是否有预扩增的主要产物带。对比目的基因产物的电泳谱带分子量和谱带的特异性，确定和描述谱带特征。 RT-PCR扩增得到的810bp的目的基因产物的