DNA限制酶切反应和限制酶谱绘制.pptVIP

PCR产物的OR鉴定 3) 分子杂交 适合于检测PCR产物的非限制酶位点上碱基突变。它是利用两条引物链间的特异性DNA片段作探针(常为人工合成的一段低聚核苷酸，约20 n.t.).当这种探针的核苷酸序列与待测的DNA核苷酸序列完全互补时才能杂交。如果利用多种等位基因特异性寡核苷酸探针（allele-specific Oligonucleotide, ASO）与PCR产物进行杂交，可检测出PCR产物的碱基突变。 可直接利用斑点杂交方法用于基因型分析 4) 核苷酸序列分析 ??????????? DNA扩增产物 变性 与末端标记的扩增引物或定序引物退火 双脱氧核苷酸链终止反应，测定DNA序列 二．Taq DNA聚合酶的特点 Taq DNA聚合酶是从一种极度嗜热水生栖热菌YT-1中分离纯化而得。该酶的分子量为63-68 kD 1. 无磷酸单酯酶、磷酸二酯酶以及单链外切酶活性，无内切酶活性，但具有依赖于聚合酶活性的5’ 3’外切酶活性 2. 最适反应温度为80℃ 3. 最适pH8.0和最佳反缓冲液Tris·HCl 4. 最佳二价阳离子Mg2+ （10 mM） 5. 具良好的热稳定性：在90℃下连续反应30分钟仍有70%的酶活 Taq DNA聚合酶的特性 当采用Ta