湖南师范大学生科院基地班袁婺洲老师课件融合蛋白表达系统.pptVIP

第二章 基因工程的工具酶与载体 第三节 表达载体 二、融合蛋白表达系统 表达载体的基本结构 1、融合蛋白表达系统的概念 蛋白质融合表达是指外源基因与载体已有的担体蛋白的编码基因拼接在一起，并作为一个新的开放阅读框进行表达。 2、用于融合蛋白构建的高表达的担体蛋白 GFP融合蛋白的表达 4、融合蛋白中目的蛋白的分离和回收 4、融合蛋白中目的蛋白的分离和回收 5、融合蛋白表达的优点 融合蛋白表达载体移码问题 融合蛋白在体表达--IRES序列的引入 * * 表达蛋白的识别？ 表达蛋白的分离？ 表达蛋白的活性？ 蛋白表达的高效性？ 蛋白表达的可控性？ 目的基因 启动子 担体基因 接头 Met Stop 载体 β-半乳糖苷酶（LacZ） 容易识别、免疫亲和分离 绿色荧光蛋白（GFP） 容易识别 谷胱甘肽转移酶（GST） 免疫亲和分离、维持良好构象 金黄色葡萄球菌蛋白A（SAPA）免疫亲和分离 泛素蛋白（Ubi） 维持良好空间构象 硫氧化还原蛋白（TrxA） 维持良好空间构象 MCS pUC18/19载体 Lac Z α 目的蛋白 3、融合蛋白表达载体 T7载体系统 His标签 +目的蛋白 谷胱甘肽S－转移酶（GST）融合蛋白表达系统 ATG GST 目的蛋白 加强GFP表达的哺乳动物细胞融