DNA和蛋白质技术与植物有效成分的提取.pptVIP

一、DNA的粗提取与鉴定 1．基本原理 (1)DNA在不同浓度的 NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的 NaCl溶液中的溶解度最低； (2)DNA不溶于酒精溶液； (3)DNA不被蛋白酶所水解； (4)DNA可被二苯胺染成蓝色。 2．方法目的 特点提醒　①哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有00DNA，不适于作DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。 ②实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA；第二次目的是稀释 NaCl溶液。 二、多聚酶链式反应(PCR)扩增DNA片段 1．实验原理 DNA分子复制。 2．实验材料 引物、PCR仪(自动调控温度)、 TaqDNA聚合酶、DNA模板、原料(四种脱氧核苷酸)。 3．实验过程 (1)模板DNA的变性：模板DNA经加热至94 ℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。 (2)模板DNA与引物的复性：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55 ℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。 (3)引物的延伸：DNA模板—引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以4种脱氧核苷酸为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原则，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。 重复循环变性—复性—延