非洲猪瘟病毒P54基因原核表达载体的构建与表达.pdfVIP

中国兽 医科学 2009，39(04)：316320 ChineseVeterinaryScience 中图分类号 ：S852．659．1：Q 786 文献标志码 ：A 文章编号 ：l673一,1696(2009)04—0316一O5 非洲猪瘟病毒 P54基因原核表达载体的构建与表达 侯艳梅 ，董志珍 ，赵祥平 ，李 琳 ，肖 妍 ，陈本龙 ，蔡 国瑞 ， 栾慎顺 ，王建华 (1．天津出入境检验检疫局，天津 300456；2．天津大学 农业与生物工程学院，天津 300072) 摘要：根据GenBank中非洲猪瘟病毒 (ASFV)P54基因序列，设计合成 了2对引物，采用PCR方法从 ASFVDNA 中分别扩增出了P54基因片段和经过 改造的跨膜信号肽缺失的P54基 因，将其克隆到表达载 体 pET28b中，构建 了重组质粒 pETP54和 pETP54q，测序验证后转化入表达宿主菌 BL21(DE3)，经 IPTG诱导表达 ，表达产物经 SDS—PAGE，Western—blotting检测。结果显示，经过改造的信号肽缺失的重组 菌pET—P54q可表达出分子质量约24．5ku的重组融合蛋白，表达的蛋白以可溶形式存在于菌体 中，经镍柱