浙江大学生物化学实验甲蛋白质的两性反应和等电点的测定.pptVIP

蛋白质的两性反应和等电点的测定 1、原理 ⑴、蛋白质等电点的概念及测定 蛋白子分子是由氨基酸组成的，而氨基酸带有可 解离的-NH2和-COOH，是典型的两性电解质。在蛋白质 分子中虽然肽链内部氨基酸的-NH2和-COOH均用于形成 肽键，但其末端的-NH2和-COOH是游离的，此外，在氨 基酸侧链上还含有酚基、胍基、咪唑基、-NH2和-COOH 等酸碱基团。因此，蛋白质和氨基酸一样是两性电解质， 在一定的pH条件下就会解离而带电。即在蛋白质溶液中 存在下列解离平衡： 蛋白质的两性反应和等电点的测定 0 蛋白质的两性反应和等电点的测定 蛋白质的带电性质和多少取决于蛋白质分子的性 质、溶液的pH值和离子强度。 当调节溶液的pH达到一定的数值时，蛋白质分子 所带正、负电荷的数目相等，以兼性离子状态存在，在 电场中，既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液 的pH值称为该蛋白质的等电点（ pI ）。 当溶液的pH值低于蛋白质的等电点时，蛋白质分 子带正电荷，为阳离子；当溶液的pH值高于蛋白质的等 电点时，蛋白质分子带负电荷，为阴离子。 在等电点时，蛋白质的物理性质如导电性、溶解 度、粘度、渗透压等都降为最低，可据此测定蛋白质的 等电点。 蛋白质的两性反应和等电点的测定 本实验即采用蛋白质在不同pH值溶液中形成的溶 解度变化和指示剂显色变化来观察其两性解离现象，并 从