动物遗传育种学实验导.doc

动物遗传育种学实验指导 向钊 王维林 王玲 周沛 周萍 西南大学荣昌校区 二OO八年二月 目录 实验一 小鼠骨髓细胞染色体标本制作 2 实验二 人体外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备 5 实验三 染色体显带技术 9 实验四 染色体组型分析 15 实验五 植物多倍体诱发 20 实验六 果蝇的单因子杂交实验 22 实验七 人群单基因遗传基因频率分析 27 实验八 群体蛋白多态聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测 33 实验九 动物血液DNA提取 39 实验十 RAPD——动物DNA多态检测 42 实验十一 遗传力计算 44 实验十二 遗传相关计算 47 实习十三 体尺测量与外貌鉴定 49 实习十四 生长发育的计算与生长曲线的绘制 52 实习十五 体重估测与体尺指数的计算 56 实习十六 家畜的摄影 59 实习十七 系谱的编制 63 实习十八 系谱审查后裔测验 69 实习十九 个体育种值的估计 73 实习二十 选种指数的制订与计算机应用 76 实习二十一 近交系数与亲缘系数的计算 85 实习二十二 群体有效含量的计算 88 附录一 器皿清洗与灭菌消毒 91 附录二 培养液和常用试剂的配制 94  实验一 小鼠骨髓细胞染色体标本制作 目的和要求通过这一实验，要求学生了解哺乳动物染色体标本的制作方法，并对动物染色体进行观察。实验原理由于中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。 材料材料：小白鼠。设备：天平，离心机，显微镜。药品：秋水仙素姬姆萨染液固定液低渗液生理盐水。 步骤秋水仙素处理——取骨髓——低渗处理——固定——离心——再固定——再离心——滴片——染色——镜检——封片。 秋水仙素）2～3滴，酒精灯上烘烤一下，放在片盘上，空气干燥法制片，干燥后，加注标签. 6．染色和观察 将标本片反扣在染色缸上,将1:10的Giemsa染液染色缓缓加入染色缸标本片下,不能形成气泡。扣染30分钟后，自来水冲洗。待制片干燥后置显微镜下观察。 在显微镜下观察小白鼠小白鼠作业选择染色体清晰，分散度好的细胞显微摄影，待做核型分析。绘出所观察到的有丝分裂图像。实验二 人体外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备 一、目的与要求 1、初步掌握人体外周血淋巴细胞短期培养的基本方法。 2、初步掌握人体外周血淋巴细胞染色体标本制备的技术方法 二、实验原理 人体外周血淋巴细胞培养(人体末稍血、微量全血短期培养)及其染色体标本制备是国内外研究显示染色体最常用和效果最好的方法。此方法取材方便，用血量少，操作简便，现已广泛应用于基础医学、临床医学的研究和染色体病的诊断等。人体外周血中的小淋巴细胞，是已分化、处于Go期的细胞，几乎不具有分裂增殖能力，在离体血培养细胞中很难找到正在分裂的淋巴细胞。因此，需采用刺激细胞增殖的措施。人们发现从芸豆(菜豆)中提取的植物血球凝集素(植物血凝素PHA)可以刺激小淋巴细胞进行有丝分裂，即在PHA作用下，处在G0期的小淋巴细胞可转化为淋巴母细胞。、淋巴母细胞具有分裂能力，重新进入增殖周期进行有丝分裂。在PHA作用下体外培养72小时左右，多数淋巴细胞已处于细胞周期的第二周期。此时，细胞分裂相较多，但都处于分裂的不同时期。一般制作染色体标本，主要是显示细胞分裂中期染色体。。因中期染色体形态最为典型、最为清晰，最易辨认，是研究染色体的最好阶段。为了获得大量可供分析的中期染色体，需在终止细胞培养前数小时加入适当浓度的有丝分裂阻断剂——秋水仙素(或其衍生物秋水仙胺).它可特异地抑制纺锤丝的形成、阻抑分裂中期活动而使细胞分裂停滞于中期。借此可获得大量中期分裂相细胞。 在进行染色体标本制备的过程中，首先要进行低渗处理，使细胞体积胀大、染色体松散开而便于观察分析。最常用的低渗液为0.075mol/L的KCl，也可用水或1％枸橼酸钠等。低渗后的细胞需用固定液固定。醋酸固定液具有膨胀、固定作用。它和醇类混合固定，有利于染色体松散，可获得分散好、易于分析的分裂中期染色体标本。现在常用的固定液为甲醇-冰醋酸(3：1)固定液。 三、材料520U／ml肝素，40ug／ml秋水仙碱，PHA，0.075mol／L KCl低渗液，甲醇，冰醋酸，Giemsa染液，二甲苯和香柏油。 3、器材、仪器设备 超净工作台，光学显微镜(附照相设备)，隔水式恒温培养箱，离心机，冰箱，高压蒸汽消毒锅，鼓风干燥箱，无菌正压滤器，分析天平(感量l／10毫克)，架盘天平，链霉素培养瓶及瓶塞，肝素小瓶及瓶塞(取血用)，10ml吸管，直头小吸管，5ml刻度离心管，2ml或5ml