四种核酸染料对用LAMP方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的影响.pdfVIP

四种核酸染料对用LAMP方法 检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的影响 袁向芬，吴绍强，林祥梅 (中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所，北京 100029) 摘 要：本研究 旨在建立一种基于颜色变化的北美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 (PRRSV)RT-LAMP检 测方法及结果判定方法，方便LAMP技术的现场检测应用。根据 GenBank中美洲型PRRSV的保守序列设计一 套LAMP引物，对反应进行优化后建立了PRRSVLAMP检测方法。对比Dye63、钙黄绿素 (Calcein)、SYBR GreenI和Picogreen4种核酸染料对于LAMP反应的适用性。结果显示，只有 Calcein、Dye63适于LAMP反应 前加入，但对扩增效率均产生一定抑制，造成反应时间延迟：Calcein的延迟作用更强 (约 10rain)，Dye63延 迟作用较小 (约5min)。加入Dye63的LAMP反应灵敏度为2×10拷贝，而加入 Caleein的灵敏度要低 10倍。 经多功能酶标仪对荧光强度的检测，含Dye63的反应阴阳性差异明显，可用