培养基的配制灭菌.ppt

环境微生物实验（四） 培养基的配制和灭菌 实验目的 实验材料 实验方法 实验作业 实验目的 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的使用方法。 熟悉微生物的有关准备工作及操作方法。 实验材料 药品：相关配方 器材：高压蒸汽灭菌器 其它： 实验方法 培养基的配制 选择配方: 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 过滤：除去杂质。 加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当补水。 调pH值：用NaOH或 HCl调pH，用pH试纸对照。 分装：注意不要污染棉塞。 包扎成捆，挂上标签,注明何种培养基。 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g 氯化钠 3g 琼脂 24g 水 1000mL pH 7.2~7.4 马铃薯蔗糖琼脂培养基 去皮马铃薯 200g （煮沸30min后过滤,用汁液） 蔗糖 20g 自来水 1000mL 琼脂 24g pH 自然 单倍乳糖蛋白胨培养液 蛋白胨：10g 牛肉浸膏：3g NaCl： 5g 乳糖：5g 水：1000ml 1.6％溴甲酚紫乙醇溶液：指示剂 pH：7.2 分装试管;10ml/管，内放置倒置小管； 同单倍乳糖蛋白胨培养液；浓度三倍； 蛋白胨：10g*3 牛肉浸膏：3g*3 NaCl： 5g*3 乳糖：5g*3 水：1000ml 1.6％溴甲酚紫乙醇溶液：指示剂 pH：7.2 分装试管;10ml/管，内放置倒置小管； 蛋白胨：10g 乳糖：5g 琼脂：24g K2HPO4：2g 水：1000ml 2%伊红：20ml 0.5％美蓝：13ml 注意：伊红和美蓝液单独分装灭菌，使用前再和其它成分混合使用； 1组： 牛肉膏蛋白胨培养基：1000mL 斜面：40支×7mL 其它：分装三角瓶(700ml) 2组： 马铃薯培养基：500mL 装入三角瓶中 3组： 单倍乳糖发酵培养基： 600 mL 分装至试管60支； 三倍乳糖发酵培养基：300 mL 分装至试管30支； 4组： 伊红美兰培养基：400mL 分装至三角瓶中； 其它准备材料： 90mL无菌水：250mL三角烧瓶（加石子），精确加水90.0mL；塞上棉塞，包扎、灭菌备用； 1个/组； 试管无菌水：试管精确加水9.0mL，塞上棉塞，包扎、灭菌备用:（14支/组）； 250ml空三角瓶：1个/组；灭菌后取样用； 1mL 无菌吸管: 20-30支/组； 10mL 无菌吸管: 1支/组。 固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问题？ 培养基中加琼脂的作用是什么？为什么？ 琼脂的最有用特性是它的凝点和熔点之间的温度相差很大 ，其特点：具有凝固性，稳定性，能与一些物质形成络合物等物理化学