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蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 ? 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB是进行蛋白质分析最流行和成熟的技术之一。本指南讨论Western Blot操作方法及常见问题分析，有助于成功完成WB。 ? ?? A 蛋白样本提取制备 ????? 1 细胞或组织裂解 ????? 2 蛋白酶和磷酸酶抑制剂 ????? 3 蛋白定量 ????? 4 电泳上样样品的准备 B? 电泳 ?? 1 PAGE胶的制备 ? 2 蛋白分子量Marker ? 3 阳性对照 ? 4 内参对照 ? 5 上样与电泳 C? 转膜与显色（Western Blot） ? 1 胶中蛋白的检测 ? 2 蛋白转膜 ? 3 膜上蛋白的检测：丽春红 ? 4 膜的封闭 ? 5 一抗的孵育 ? 6 二抗的孵育 7 显色 ?D 常见问题分析与解决方案 ? 附录1? WB实验试剂配制方法 附录2 ?SDS胶的配制 ??????????????????????? WB概述: ?检测原理: ? ? A 蛋白样本提取制备 ??蛋白样品制备是Western Blotting的第一步，更是决定WB成败的关键步骤， ??总体原则和注