人脐静脉内皮细胞移植治疗角膜内皮衰竭实验.pdf

独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致 谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果， 也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 翱 签字E1期： 盟年旦月尘日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保 留、使用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部 门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借 阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编 入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保 存、汇编学位论文。 论文作者签名： 指导教师签名： 签字日期： 日 人脐静脉内皮细胞移植治疗角膜内皮 衰竭的实验研究 硕士研究生：崔 丽 指导教师：马 翔教授 指导小组：孙洪臣教授 专业名称：眼科学 摘 要 目的：角膜内皮疾病如大泡性角膜病变、Fuehs角膜内皮营养不良、 内眼手术后内皮失代偿等是导致角膜混浊和视力下降的重要原因。每年 全世界约有100万以上的患者因为角膜内皮功能失代偿而导致失明，目前 唯一有效的治疗方法是穿透性角膜移植术。虽然该术式成功率较高，但 由于供体角膜缺乏、术后排斥反应、角膜供体老龄化等原因而受到限制。 组织工程化角膜是当今眼科领域的研究热点，而亟待解决关键问题之一 是如何构建角膜内皮组织。人们尝试多种方法培养角膜内皮细胞，但因 受到供体角膜缺乏，载体稳定性差，手术操作中易破碎等因素限制，至 今仍无法应用于临床。为寻求一种不依赖于供体角膜而构建角膜内皮组 umbilicalvei‘n 织的有效方法，本实验首次取人脐静脉内皮细胞(Human endothelial 并以异种脱细胞角膜基质为载体进行后板层角膜移植(Posterior endothelial 通过与单纯脱细胞角膜基质移植及单纯去除内皮进行对比，探讨异种脱 细胞角膜基质培养人脐静脉内皮细胞移植治疗角膜内皮衰竭的可行性。 方法：1．动物模型：30只新西兰白兔(2．5～3 kg)，麻醉后沿左眼角 膜缘切开2700，显微镜下全角膜范围去除角膜内皮细胞，建立机械损伤 所致的内皮衰竭动物模型。将动物模型随机分为3组，实验组、基质组和 对照组，每组10只动物，4周后实验组和基质组行后板层角膜移植术。2． 载体制备：取猪角膜全层，制成直径为7，5mm、厚约0．1mm板层角膜片， 色，观察细胞是否去除完全。3．细胞培养：采用0．1％胶原酶I灌流消化 法获取人脐静脉内皮细胞，用含有20％胎牛血清和10 VEGF的 ng／ml 脱细胞角膜基质上继续培养，倒置显微镜进行形态学观察，一周时细胞 在脱细胞角膜基质上生长成完整单层后用于移植。4．移植手术：做直径 mm 为9mm、3，4角膜厚度的带蒂前层角膜瓣并掀置一侧，再用直径7．2