豚鼠气单胞菌CB101中几丁质酶基因的克隆及异源表达的全酶蛋白与酶片段的功能的分析.pdfVIP

M92s04， 冰浴轻晃10min； (7)4℃下8000rpm离心20min，上清即周间质总蛋白； (8)用适当缓冲液透析，冻干，再用4—6mLbu腩rA重溶； (9)加lmL (10)将混合物上柱，装柱前柱底用底帽封上： (11)去帽盖，逐管收集流出液； (12)用bu仃crB清洗2次，每次2mL： 蛋白所在，4℃保存。 3结果与讨论 3．1结果 3．1．1几丁质降解菌cBlOl的分离与鉴定 从厦门近海海域采集得到的6份不同泥样和水样中，分离到十几株具有较高几丁 质酶活性的细菌和放线菌。将这些初筛获得的菌株接种到以胶体几丁质为唯一碳源和 具有较高的潜在工业应用价值。经鉴定该菌株为豚鼠气单胞菌(爿鲫珊Dn甜∞vme)。 3．1．2豚鼠气单胞菌cBl01产酶的初步分析 分别接种等量cBl01于四种不同培养基(口为生长培养基、一为生长培养基加l ％葡萄糖、▲为生长培养基加1％晶体几丁质、△为生长培养基加l％胶体几丁质) 中摇瓶培养，选取不同时段检测培养液上清中几丁质酶总活力，结果(图1)显示cBlol 在无几丁质的诱导下能组成型分泌少量几丁质酶。添加胶体几丁质诱导物后的表达量 大幅增加