实验一氨基酸的分离鉴定——纸层析法%3f.pptVIP

氨基酸的分离鉴定——纸层析法 一、实验目的 1. 掌握纸上层析的一般原理和方法 2. 了解氨基酸的特征性颜色反应 二、实验原理 纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。当有机相流经固定相时，物质在两相间不断分配而得到分离。 溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示： Rf =原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离= X/Y 在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。 Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。 三、实验器材 （1）层析缸 （2）毛细管：5只/组。 （3）培养皿：1只/组。 （4）层析滤纸（长16cm、宽16cm的）： 1张/组。 （5）直尺、铅笔：自备。 （6）电吹风：1只/组。 （7）针、白线：1套/组。 （8）小试管：4只/组 四、实验试剂 1. 展层剂和平衡液 正丁醇:冰醋酸:水=4:1:5，充分摇匀，用分液漏斗取上层液作展层剂；下层液作平衡液(弃去)。 2. 样品液 用水配成每ml含有丝氨酸、亮氨酸、脯氨酸各4mg/ml的氨基酸溶液，以及上述四种氨基酸的混合液(各4mg/ml)。 3. 茚三酮 按展层剂0.25%的比例将茚三酮加入展层剂中，使其溶解。