gm-csf和zlf1融合基因重组腺病毒表达载体的构建.pdfVIP

GM．CSF和BZLFl融合基因重组腺病毒表达载体的构建 摘要 目的 将人粒细胞．巨噬细胞集落刺激因子(GM．CSF)编码基因与EB病毒 (EBV)即刻早期基因(BZLFl)进行融合，构建融合基因的重组腺病毒表达载体， 旨在发挥融合基因编码产物GM．SCF增强抗肿瘤免疫，以及BZLFl诱导潜伏期EBV 进入裂解期复制的作用，为协同杀伤EBV阳性肿瘤细胞提供实验基础和理论依据。 方法 逆转录．聚合酶链反应分别获得目的基因GM．CSF和BZLFl编码序列的 extension，SOE)技术将两段基因通 cDNA，采用剪接式重叠延伸(splicedoverlap BJ5183中完成 基因BZGM定向亚克隆-至pAdTrack．CMV穿梭质粒，在原核细胞晟cold 穿梭质粒与骨架质粒pAdEasy．1的同源重组，构建融合基因BZGM真核表达载体 pAd．BZGM。经抗生素培养板筛选重组体，然后转染293细胞，获得复制缺陷型重 组腺病毒vAd．BZGM。RT．PCR和Western