氯化镧导致原代鼠皮层神经元损伤作用的研究.pdf

目 录 一、摘要 中文论著摘要………………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………。4 二、英文缩略语…………………………………………………………………………7 三、论文 —1．￡．—JL一 刖舌…………………………………………………………………………………………………………”8 材料与方法…………………………………………………………………………9 结果………………………………………………………………………………14 讨论…………………………………………………………………………………………………………20 结论…………………………………………………………………………………………………………24 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………25 五、参考文献…………………………………………………………………………26 六、附录 综述…………………………………………………………………………………………………………29 致谢…………………………………………………………………………………………………………45 个人简介…………………………………………………………………………．46 ·中文论著摘要· 氯化镧导致原代大鼠皮层神经元损伤作用的研究 刖 声 稀土(rare earth，I迮)包括17种元素，其中镧至铕为轻稀土元素，钆至钇为 重稀土元素。我国是稀土资源最多的国家，近年来随着稀土在农业、畜牧业、工 业、国防和高技术产业及现代生物医学上应用的日益扩展，稀土元素正在广泛进 入环境，并通过食物链进入人体。因此，稀土对生态环境和人体健康的影响及其 生物学效应，已成为不容忽视的卫生学问题。 已有报道表明RE具有神经毒性。稀土矿区流行病学调查显示，长期摄入 RE使儿童智商和记忆力下降，从而危及矿区儿童的基本素质，可能造成深远影 响。动物实验也证明RE影响学习记忆，可能涉及降低抗氧化能力；干扰脑内微 量元素的代谢；影响酶活力和神经递质的释放等。 镧作为轻稀土元素的代表，化学性质比较活泼，动物实验表明镧具有神经毒 性，但其作用机制尚不清楚。本研究以大鼠皮层神经元为研究对象，观察不同剂 量镧处理组神经元的线粒体活性，细胞内活性氧含量，线粒体膜电位和bcl．2、bax mRNA表达的改变以及细胞凋亡的变化情况，来探讨氯化镧对神经元的凋亡及其 线粒体功能的影响，为阐明稀土元素的神经毒性机制提供新的实验证据。 实验分组 照组应用无血清DMEM。 研究方法 l、神经元免疫细胞化学法纯度鉴定 2、MTT法测定神经元线粒体活性 3、DCFH．DA荧光探针法测定细胞内ROS含量 4、Rhodaminel23荧光探针法测定神经元线粒体膜电位 mRNA表达 5、RT-PCR法测定神经元bcl．2，bax 6、流式细胞仪法测定细胞凋亡率 7、倒置显微镜观察神经元形态学改变 结 果 l、神经元的鉴定 显微镜下可见绝大部分细胞胞浆被染成棕黄色，每张玻片选择10个视野，计 数阳性细胞比例，免疫阳性细胞可达90％以上，因此可以将此原代培养细胞作为 神经元的体外模型。 2、神经元线粒体活性的改变 镧暴露后细胞线粒体活性下降，各剂量组与对照组相比差异均显著(p0．01)， 且呈现一定剂量一反应关系。 3、细胞内活性氧含量的改变 镧暴露后细胞内ROS水平呈升高趋势，各剂量组细胞内ROS水平均高于对 照组且统计学差异显著(pO．05)。 4、线粒体膜电位变化 镧暴露组细胞线粒体膜电位均降低，并随镧暴露浓度的增加而降低显著，与 对照组比较有明显差异(pO．05)。 5、bcl．2、bax mRNA表达改变 镧暴露组神经元baxmRNA表达增多，同时bcl．2