基础生化第一章蛋白质资料.ppt

4. 疏水性 疏水作用层析 类似于盐析，高离子强度下样品上柱，除去蛋白质水膜，因此与层析柱中的疏水基团结合，极性不同的蛋白质结合力不同，然后洗脱。 亲和层析 5.特殊亲和力 返回节 P37 五、Pr含量的测定 四、Pr相对分子质量的测定 凝胶过滤法 SDS沉降速度法 P38 P41 六、Pr纯度的测定 电泳法 末端化学分析法 沉降法 HPLC法 质谱法 P41 必要而非充分条件 名词解释 pI 蛋白质变性 超二级结构 结构域 变构效应（别构效应） 简答题 1.简述标准氨基酸的结构特点及其分类。 2.蛋白质沉淀的因素有哪些，原理是什么？ 3.简述蛋白质结构的层次性。 4.维持蛋白质结构的作用力有哪些？ 思考题 羊毛衫等羊毛制品在热水中洗后在电干燥器内干燥则收缩。但丝织品进行同样处理却不收缩。如何解释？ 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 蛋白质的紫外吸收峰在280nm * 氨氨基酸均含有一个手性?-碳原子 * 氨基酸所带的电荷取决于什么？ * 氨基酸所带的电荷取决于什么？ * 目前多用DNS代替Sanger试剂。 * 胜鍵 看似單鍵，但 C-N 鍵旁的 C=O 雙鍵會與它產生共振，因此具有雙鍵的性質；且中心的 C 與 N 原子都是使用 sp2 軌道，因此其前後六個原子都躺在同一平面上，稱為胜平面 (如上圖虛線所圍起)。注意每一個胺基酸的中心是 a 碳，而兩個 a 碳之間是以胜平面連在一起，因此蛋白質可以說是由許多胜平面以 a 碳為接點連成的。 * 親和層析法有點像在釣魚，魚是我們所要的分子 (B) 雜夾在一堆蛋白質當中，魚餌是與 B 具有專一性的分子 (A, 上圖 1)；A 與 B 的專一性很高，只會在樣本中與 B 結合，而排除其他雜質 (上圖 2)；若把結合在吸著劑上的 B 溶離下來，就可以得到均質的 B (上圖 3)。 * 血红素辅基与氧结合的机制 2.与氧结合的机制 血红素的结构 铁原子与卟啉环平面相对位置的改变 P75 氧合时，铁原子被拉回卟啉环，卟啉环也由圆顶状变为平面形。 同时牵动F螺旋，引发构象变化。 P75 氧合导致卟啉环的变形和F螺旋的牵引 四级结构：4个亚基分布在四面体的4个角，链间以离子键结合，有中央空穴可结合其他配体。 3.不同：Hb的四级结构 P75 （三）Hb的别构效应 氧合后血红蛋白的构象变化：2个αβ二聚体之间相对移动发生错位、四级结构随之改变。 构象的改变促进第二亚基的氧合。 P79 肌红蛋白和血红蛋白的氧合曲线 工作肌肉毛细血管中 Hb两种主要的构象态： R态（氧合Hb的优势构象）和T态（去氧Hb的优势构象） T态亚基间8对盐桥 T态借助于盐桥被稳定。在4亚基间的8对盐键，它们的形成和断裂使整个分子的空间构象发生变化。 P78 Pr的结构和功能 一级结构是基础 高级结构直接决定功能 但近年来发现了一些固有无折叠的蛋白质， 它们松散存在但仍有活性。 返回章 第五节 蛋白质的性质及研究方法 一、Pr的理化性质 二、Pr一级结构的测定 三、Pr的分离、纯化 四、Pr相对分子量的测定 五、Pr含量的测定 六、Pr纯度的鉴定 一、Pr的理化性质 （一）紫外吸收 （二）两性解离 （三）胶体性质 （四）沉淀反应 （五）Pr变性 （六） Pr水解（自学） （七） Pr的颜色反应（自学） P30 （一）紫外吸收 280nm （二）两性解离 主要是可解离的侧链基团。 P31 等电点 等离子点:纯水中测定的等电点，Pr的特征常数。 1.蛋白质溶液具有胶体溶液的典型性质: 如丁达尔现象；布郎运动；不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。 （三）胶体性质 2.蛋白质胶体溶液的稳定性决定于： 质点的大小：1-100nm 同种电荷的排斥力 水化层 P31 （1）盐析 （2）pI沉淀： （3）有机溶剂 （4）重金属 （5）生物碱试剂 和某些酸 （6）加热 1.沉淀因素 （四）Pr沉淀作用 P31 水化层 同种电荷的排斥力 水化层、降低介电常数 pH大于pI时，带负电的Pr与其结合 pH小于pI时，带正电的Pr与其结合 热变性导致构象解体，疏水基团外露，破坏水化层。 在温和条件下，通过改变溶液的pH或电荷状况，使蛋白质从