第五章酶工程制药技术资料.ppt

第五章 酶工程 学习目标 目 录 一、酶的特性 高效性 以分子比表示，酶的催化反应的速度比非催化反 应高108—1020倍，比非酶催化剂高105—1013倍。 高效性 酶的分类 二、酶工程的研究内容 第三节 药物的酶法生产 一、酶的选择 1.底物特异性 2.pH 3.温度 4.激活剂和抑制剂 5.价格因素 第三节 药物的酶法生产 二、酶的反应条件 1.底物浓度对反应速度的影响 2.酶浓度对反应速度的影响 3. pH对反应速度的影响 4.温度对反应速度的影响 5.激活剂和抑制剂对反应速度的影响 三、酶和细胞的固定化技术 （一）固定化酶的制备 1. 固定化酶的定义——是指限制或者固定于特定空间位置的酶，具体来说，就是指经过物理、化学方法处理，使酶变成不易随水流失的固定化催化剂。 制备固定化酶的过程称为酶的固定化。 酶可以采用经过分离后高纯度的提纯酶、也可以是菌体细胞碎片上的酶系，甚至可以是死细胞上的酶。 三、酶和细胞的固定化技术 （一）固定化酶的制备 2. 固定化酶的特点 （1）稳定性很高，可以多次连续使用。 （2）产物中不含酶，易于纯化。 （3）反应条件易于控制，可实现连续化和自动控制。 （4）酶的利用率高，实际使用量较少。 （5）比水溶性酶更适合进行多酶反应。 （6）固定化酶属于修饰酶，可以改良。 （一）固定化酶的制备 3. 酶和细胞的固定化方法 （1）物理吸附法 A、物理吸附法的优点：（1）操作简单（2）可选用不同的吸附剂（3）酶失活之后，载体可以再生 B、物理吸附法的缺点：（1）酶的最适吸附量无规律可寻（2）酶与载体之间的吸附力不强，酶容易脱落。 C、常用的吸附剂 （2）离子结合法 A、离子结合法的优点----操作简单、处理条件温和，酶的活性中心不容易被破坏。 B、离子结合法的缺点----载体和酶的结合力较弱、常常发生酶脱落的现象 C、常用的离子结合剂 树脂----阴离子交换树脂、阳离子交换树脂、多糖类离子交换剂、合成高分子类离子交换剂。每克载体能吸附50-150mg酶蛋白。 DEAE-纤维素 Amberlite-CG-50 Amberlite-XE-97 Amberlite-IR-45 Dowex-50 （3）共价键结合法 酶分子上的氨基、羧基、羟基、咪唑基、巯基与载体表面的反应基团形成共价键，因而将酶固定在载体上的方法。 A、共价键结合法的优点----酶与载体结合牢固，酶不会发生脱落。 B、共价键结合法的缺点----操作复杂、反应条件苛刻，酶的活性中心会遭到部分性的破坏。 C、共价键结合法的类别 重氮化 迭氮化酸酐活化法 酰氯法异硫氰酸酯法 缩合剂法溴化氰活化法 烷基化法纪硅烷基化法 交联法 交联法是采用双功能、或者多功能试剂，使得酶与酶之间发生交联的固定化方法。基团之间的交联通过共价键结合。 交联法的优点----交联后的酶活性较高 交联法的缺点----反应条件剧烈、酶的回收率低。 交联法的类别和内容 类别 酶与酶交联法 酶与辅助蛋白交联法 吸附交联法 载体交联法 内容 分子内交联 分子间交联 酶与辅助蛋白分子之间交联 酶与载体之间交联 （3）参与交联的酶蛋白功能团和常用的交联剂 参与交联的酶蛋白功能团 N-末端的α-氨基 赖氨酸的ε-氨基 酪氨酸的酚基 半胱氨酸的巯基 组氨酸的咪唑基 常用的交联剂 戊二醛 双重氮联苯胺-2、2-二磺酸 1、5-二氟-2、4-二硝基苯 已二酰亚胺二甲酯 3、包埋法 包埋法的优点----不需要改变酶的高级结构，酶的回收率较高。 包埋法的缺点----包埋酶容易导致酶的失活，包埋法只适用于小分子底物的反应过程，大分子底物由于无法进入凝胶，故不适用。 包埋法分为三类（1）网格型 （2）微囊型 （1）凝胶包埋法 网格法也称凝胶包埋法，是指将酶包埋在高分子凝胶的细策网格之中。凝胶包埋法是目前因定化技术中用得最多的方法。所用的凝胶有： 聚丙烯酰胺聚乙烯醇光敏树脂淀粉明胶胶原海藻胶（卡拉胶）角叉菜胶 （2）微囊化包埋法 将酶包埋在高分子半透膜中的方法，称为 微囊化包埋法。 微囊化固定化酶的优点----微囊化固定化酶的直径为几微米到几百微米之间的球状体，其颗粒较小，有利于大分子底物进行反应。 微囊化固定化酶的缺点----反应条件要求高，制备成本也较高。 （3）纤维包埋法 此法适用于大规模生产。纤维包埋法所形成的聚合物，每克能够包埋1500mg的转化酶，并且具有良好的稳定性。 制备时，先把含酶水溶液在高聚物（醋酸纤维素、聚氯乙烯）的有机溶剂（二氯甲烷）中进行乳化，↓然后将乳化液通过一多孔喷丝头挤压进凝结浴池中，形成纤维↓酶溶液便被包裹在纤维内↓将纤维编织成各种酶布，以适合反应器的要求。