2005-分子克隆技术--课程教程分析.ppt

从低严谨度到高严谨度冼膜液（具体情况而定）1×SSC/0.1%SDS洗膜两次（冷5min，热65℃，15min）?检测信号强度 ?0.5×SSC/0.1%SDS 热冼 65℃, 15min ?依情况可有改动0.2×SSC/0.1%SDS or 0.1×SSC/0.1%SDS。SSC调整[Na+]，缓冲容量大，改变Tm，从而洗掉非特异性探针杂交体，0.1%SDS可以洗去膜上的封存剂。 3．洗膜 4．包膜 膜从洗膜液中捞出，在滤纸上凉干，膜表面无可见水膜为止（忌太干，以防探针难以洗脱，影响再次使用）用保鲜膜包膜，压片，-20℃或-70℃，依据信号强弱曝光（3—7天） 5．冲洗X-光片 在暗室红灯下取出X-光片，置入显影液中至杂交带显现出来（显影时间依据信号强弱及曝光时间长短可由几秒钟到2分钟），转入清水中漂洗，然后放入定影液中定影至清亮（约10分钟）。自来水冲洗干净后，晾干，读片. 显影液配方： 成分 相纸 胶卷 X-光片 温水（40℃左右） 750ml 750ml 750ml 米吐尔 3.1g 1g 4g 无水亚硫酸钠 45g 75g 60g 对苯二芬 12g 9g 10g 无水碳酸钠 67.5g 25g 40g 溴化钾 1.9g 5g 4g 加水定容至 1000ml 1000ml 1000ml ? ? 再次使用膜前，必须洗去上次探针！ (1