原位杂交材料.ppt

Gall和Pardue于1969年建立。 １ 基因定位与基因图谱—遗传学２ 病毒学：最可靠，于组织细胞中直接  证明，病毒的存在。 EB HBV HPV３ 神经内分泌学：检查编码调节肽的mRNA,  确定激素的合成部位。４ 病理学：癌基因表达。 ５ 免疫学： Ag基因定位６ 发育生物学：基因的选择表达 原位杂交：mRNA （转录） 免疫组化：蛋白（翻译）７ 其他：细胞外基质蛋白的来源。 胶原基因表达，Ig起源细胞 1.基因组DNA探针：某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列，如病毒DNA等。 2.cDNA (complementary DNA)探针:最常用，以mRNA为模板经逆转录酶催化产生的互补于mRNA的DNA链。 3.寡核苷酸探针：10-50bp，测序、点突变。 4.RNA探针：以DNA两条链中的任意一条为模板转录生成RNA。稳定性高、特异性强。 2）地高辛 Dig-dUTP---通过酶促反应掺入到DNA中去制成探针--杂交--加抗地高辛-酶的复合物—加底物—显色 灵敏度较高：0.1pg 特异性较生物素高 是较理想的非放射性标记物 (三)探针标记原理和方法 核酸探针标记发展史 1、体内标记 ：32P 2、体外标记：末端标记 缺口