第二章染色体与DNA详解.ppt

真核生物的复制终止 1，染色体DNA呈线状，复制在末端停止 5` 5` 5` 5` 水解、聚合、连接 5` 5` 5` 5` ? ? 2，连接不连续片段 端粒酶参与解决染色体末端复制问题 切除引物的两种机制 端粒酶（ telomerase） 1、 一种RNA - 蛋白质的复合物。 2、 一种特殊的逆转录酶, 能依赖自身的RNA为模板逆转录合成端粒DNA。 复制终止时，染色体线性DNA末端确有可能缩短，但通过端粒酶的作用，可以补偿这种由除去引物引起的末端缩短。 Telomerase / 端粒酶 2.4.3 DNA复制的调控 复制起始频率的直接调控因子是蛋白质和RNA,反式作用因子（trans-acting factors）。 复制调节蛋白与复制复合物的相互作用确定复制起始频率和复制方式。（E.coli） 复制起始点 复制物位点 复制调节蛋白 复制复合物 作用 大肠杆菌 DNA复制 ColE1质粒DNA复制起始部位调控因子之间的关系 （1）细胞生活周期水平调控：限制点调控，真核细胞DNA的复制发生在S期，促使细胞由G1期进入S期的多种因子调控； （2）染色体水平的调控：决定复制子 （3）复制子水平的调控：复制子参与的多种因子均可参与调节，主要是复制起始调控，如酵母复制起始受时序调控。 3、真核细胞DNA的复制调控 * Eukaryotic cells employ a special enzyme, telomerase, to deal with this problem. Telomerase begins at the staggered end of the chromosome, where removal of the primer has left the parental strand slightly longer than the new strand. Telomerase then extends the parental strand by several dozen nucleotides. It is able to do so without a DNA template because within the enzyme is a short piece of RNA that serves as a kind of template. 真核细胞采用端粒酶这种特殊的酶来解决这一问题。端粒酶从染色体的交错末端开始，交错末端上由于去除引物而使母链比新链稍微长了一点。之后端粒酶将母链延长几十个核苷酸。它可以在没有DNA模板的情况下进行这样的反应，因为在酶的内部有一小段RNA可以作为模板用。 2.DNA的引发 RNA引物的合成 DNA链的延伸 切除RNA引物，填补缺口，连接相邻的DNA片段 双链解开、复制起始 大约20个DnaA蛋白在ATP的作用下与oriC处的4个9bp保守序列相结合 在HU蛋白和ATP的共同作用下,Dna复制起始复合物使3个13bp直接重复序列变性,形成开链 解链酶六体分别与单链DNA相结合(需DnaC帮助),进一步解开DNA双链 2、RNA引物的合成 DnaB蛋白活化引物合成酶，引发RNA引物的合成。 引物长度约为几个至10个核苷酸， 与大肠杆菌起点与复制起始有关的酶和辅助因子 参与复制的蛋白质和酶 相对分子质量 亚基数目 功能 DnaA 52000 1 识别起始点序列 DnaB 300000 6 解开DNA双链 DnaC 29000 1 辅助DnaB结合于起始点 HU 19000 2 类组蛋白，DNA结合蛋白，促进起始 DnaG（引物合成酶） 60000 1 合成RNA引物 SSB（单链DNA 结合蛋白） 75600 4 结合单链DNA RNA聚合酶 454000 5 促进DnaA活性 拓扑异构酶ii 400000 4 释放DNA解链过程中产生的扭曲张力 Dam甲基化酶 32000 1 使起点GATC序列的腺嘌呤甲基化 性质 聚合酶Ⅰ 聚合酶Ⅱ 聚合酶Ⅲ 3 5 外切活性 + + + 5 3 外切活性 + - - 5 3 聚合活性 + 中 + 很低 + 很高 新生链合成 - - + 主要是对DNA损伤的修复；以及在DNA复制时切除RNA引物并填补其留下的空隙。 修复紫外光引起的DNA损伤 DNA 复制的主要 聚合酶，还具有3’-5‘ 外切酶的校对功能，提高DNA复制的保真性 原核生物中的DNA聚合酶(大肠杆菌） DNA的半不连续复制（semi-discontinuous replication) DNA复制时其中一条子链的合成是连续的，而另一条子链的合成是不连续的，故称半不连续