蛋白质的离子交换层析进展总结.pptVIP

5.常见问题及处理 层析速度太慢 5.1 蛋白质不与树脂结合 5.2 纯化蛋白质的产率低 5.3 蛋白质分辨效果差 5.4 增加柱压并轻敲柱壁的方法以除去气泡，确保在引入任何溶液时不要产生气泡 样品蛋白质损失量允许的情况下，支撑物应取出并清洗 用高径比较小的柱子 过柱前的样品要超声或超滤处理 产生气泡 树脂基质发生粘连 层析柱太细 细小颗粒堵柱 5.1层析速度太慢 问题 处理 降低初始上样缓冲液离子强度 注意计算蛋白质的等电点 树脂应充分平衡或用严格的再生方法 初始上样缓冲液离子强度过大 树脂pH值因解吸作用而发生变化 树脂未进行适当平衡或再生的树脂未洗净 5.2蛋白质不与树脂结合 问题 处理 树脂上的蛋白质未洗净 pH值不合适或蛋白质发生沉淀 水解酶破坏了目的蛋白或树脂中有微生物滋生 5.3纯化蛋白质的产率低 增强溶液离子强度；更换活性高的反离子或使用去垢剂等方法解决。 适当调节PH 蛋白提取过程中应加水解酶抑制剂抑制蛋白水解 问题 处理 5.4蛋白质分辨效果差 流速太快或层析柱过短 梯度洗脱时洗脱液浓度变化太快 上柱蛋白质过多 降低流速 可采用连续洗脱等梯度变化较慢的洗脱 减少上样量 问题 处理 6.应用实例 混合物的分离 6.1 蛋白质的柱上复性 6.2 6.1混合物的分离 Bio-Rex70层析分离眼镜蛇神经毒素的6种