大白菜游离小孢培养技术高效体系的研究.docVIP

大白菜游离小孢子培养技术高效体系的研究 李　菲1，2　张淑江1　章时蕃1　张　慧1　孙日飞1*　张振贤2 （1中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京 100081；2中国农业大学农学与生物技术学院，北京 100193） 摘　要：以大白菜吉红82、#534DH群体及#438群体为试材，研究了利用细胞破碎仪机械提取小孢子与人工挤压提取小孢 子对大白菜游离小孢子活力及提取量的影响。结果表明：机械提取替代人工挤压可在短时间内同时提取多份样品，并可快 速调整小孢子的培养浓度。收集40个适期花蕾于5 mL离心管内，3 000 r·min-1破碎10 s，将提取的小孢子定容于25 mL NLN-13培养基，可确保小孢子浓度在适宜培养范围内，并成功诱导胚胎发生。 关键词：大白菜；游离小孢子培养；细胞破碎仪 前，通过技术改良，已建立起较为成熟的大白菜小 孢子培养体系（李菲 等，2009），成为芸薹属蔬菜 游离小孢子培养研究的主要作物之一。 大量研究显示，基因型是决定小孢子胚胎发 生能力的主要因素（Ajisaka et al.，1999；Zhang et al.，2003），但与之相关的功能基因的研究还未 见新进展。目前，集中进行大群体材料小孢子培养 难度较大，缺乏高效、稳定的培养体系。现有的培 养体系在小孢子提取环节主要依靠手工挤压，小孢 子胚胎诱导效果受人为因素干扰较大，工作效率 低，是开展群体