1.质粒DNA的提取和鉴定.pptVIP

分子生物学实验 分子生物学实验安排 实验一、质粒DNA的提取和鉴定 实验二、聚合酶链式反应技术 实验三、双酶切鉴定重组质粒 实验四、琼脂糖凝胶电泳 实验一、质粒DNA的提取和鉴定 一、实验目的 通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的方法。 提纯的思路 质粒的特性：共价、闭合、环状的小分子量DNA 要去除的物质： 　蛋白 　基因组DNA 　脂类及小分子杂质 　RNA 二、实验原理 利用共价闭合环状质粒与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们，在碱性pH，DNA变性，恢复中性时，线性染色体DNA不能准确复性，与其它大分子共沉淀，而质粒DNA却可以准确复性，留在上清中。 当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不复性而呈絮状，离心时可沉淀下来 三、实验仪器、材料与试剂 （一）仪器： 恒温培养箱、恒温摇床、高压灭菌锅、制冰机、台式离心机、微型离心机、涡漩混合器、移液器 （二）材料： 含有质粒的大肠杆菌（E. coli DH5α）、 重组质粒：pGADT7-x（7988bp+300bp） pGBKT7-x（7300bp+300bp） （三）试剂： （1）solution I：25mM Tris-Hcl,10mM EDTA,50mM Glucose 分散细胞，鳌