一株牡丹内生解淀粉芽胞杆菌、其分离方法及应用分析.doc

说 明 书 摘 要 本发明公开了一牡丹内生解淀粉芽胞杆菌、其分离方法及应用解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）Mdgb15已于2016年1 月25日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏号是GDMCC NO ：60008。本发明分离筛选提供的牡丹内生解淀粉芽胞杆菌是一优良的植物内生防病促生菌，该菌株的发酵液对盆栽牡丹具有良好的防病作用，同时有具有较好的促生作用，该生防菌株兼具防病和促生作用，通过在牡丹温室栽培上的应用，既可以改善牡丹的生长状况，又可以有效的控制病害的发生率。本发明改变了牡丹病害的传统防治方法，采用生物防治的方法进行牡丹病害的防治，可以减少化学防治对土壤及环境造成的伤害，同时降低牡丹灰霉病菌抗药性的产生，降低牡丹栽培管理中用于病害防治的成本。 摘 要 附 图 权 利 要 求 书 1. 一解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）Mdgb15，该菌株已于2016年1 月25日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏号是GDMCC NO ：60008。 2. 一种分离纯化解淀粉芽胞杆菌的方法，其特征在于包括： 步骤1：从生长状态良好的牡丹根上剥取根皮，之后在无菌条件下用质量百分比浓度为70%的酒精浸泡，之后将根皮消毒、冲洗，在确定所述的消毒方法有效后将根皮晾干作为样品，备用； 步骤2：将样品放入无菌研钵中研磨成匀浆，之后向匀浆中加入无菌水，混匀后静置制得混合液，备用； 步骤3：把混合液转入大豆酪蛋白琼脂培养基TSA）平板上，在温度为30℃的条件下培养2天后，挑取单菌落在牛肉膏蛋白胨培养基平板上纯化，即获得所述的解淀粉芽胞杆菌。 3. 根据权利要求2所述分离纯化解淀粉芽胞杆菌的方法，其特征在于：步骤1中消毒根皮的方法是将根皮置于质量百分比浓度为20%的次氯酸钠中消毒5-10min。 4. 根据权利要求2所述分离纯化解淀粉芽胞杆菌的方法，其特征在于：确定所述消毒有效的方法是随机抽取消毒后的根皮置于TSA平板上培养，48h后观察TSA，若培养基上没有菌落生成，则消毒有效；若培养基上有菌落生成，则消毒无效。5. 一种测定解淀粉芽胞杆菌对牡丹灰霉病菌拮抗作用的方法，其特征在于包括：确定实验组和对照组在马铃薯葡萄糖培养基PDA）中央处接种牡丹病原灰霉菌菌丝块，其中，实验组在距培养皿边缘处对称点接解淀粉芽胞杆菌，对照组只接病原菌菌丝块，在温度为28°C的条件下恒温培养5天后，待对照组菌丝长满平板时测量实验组的抑菌带宽度，根据抑菌带宽度的大小确定解淀粉芽胞杆菌对牡丹灰霉病菌拮抗作用的强弱 6. 如权利要求1所述的解淀粉芽胞杆菌防治盆栽牡丹灰霉病菌中的应用。 7. 一防治牡丹灰霉病菌的菌，其特征在于包括权利要求1-6中任一项所述的解淀粉芽胞杆菌。 说 明 书 一牡丹内生解淀粉芽胞杆菌、其分离方法及应用 技术领域 发明创造明属于生物技术领域，特别涉及一种牡丹内生解淀粉芽胞杆菌、其分离方法及应用。 背景技术 河南洛阳是牡丹栽培面积最大、种质资源最丰富、以牡丹观赏和药用为一体的规模化、产业化研究基地。随着牡丹栽培面积的迅速扩展与品种的增多，牡丹病害种类逐年增多，危害愈来愈重。由于牡丹病害的蔓延造成大量牡丹植株长势衰弱、花色衰退、丹皮产量低、品质差、造成了人力、物力与财力的严重浪费，是牡丹栽培中急需解决的问题。目前危害牡丹的病害主要包括牡丹灰霉病、牡丹红斑病、牡丹黑斑病和牡丹根腐病等，目前病害的防治主要以化学防治为主，但是使用药剂不仅污染环境，而且容易导致病菌产生抗药性，而不得不每年增加化学药剂的使用，从而导致防治成本累年增加，造成人力、物力和财力的极大浪费。因此，开辟新的防病措施已成为当务之急，而生物防治以其无毒无残留等优点给牡丹病害的防治带来新的希望。 近年来研究表明，植物内生细菌对植物病原菌具有较好的抑制作用，这些内生细菌不仅能稳定定殖于植物体内，不易受外界环境的影响，而且对植物具有固氮、促生、抗旱等生物功能。利用内生细菌对植物病害进行生物防治，一方面能够避免使用化学杀菌剂在杀死病原菌的同时可能杀死在环境中起重要作用的非靶标微生物，另一方面可以避免使用其他生物菌肥带来的植物根际土壤微生态平衡的破坏，从而促进植物对恶劣环境的适应和保证寄主植物健康生长。因此，植物内生细菌作为新的生防资源，发展迅速，成为当前植物病害生物防治研究的热点。由于目前关于牡丹内生细菌的研究非常有限，同时关于牡丹病害生物防治的研究较少，因此在实际生产中，牡丹病害的防治仍旧以传统的防治方法为主，造成牡丹病害防治成本的累年增加，因此迫切需要为牡丹病害的防治寻找新途径和新方法。由于内生细菌定殖于植物内部，所以牡丹内生细菌是理想的候选生防菌。目前植物