实验4肝糖原的提取、鉴定与定量.pptVIP

肝糖原的提取、鉴定与定量 实验目的 1. 掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。 2. 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。 3. 正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。 4. 熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。 5. 正确掌握溶液转移的操作。 6. 正确操作使用分光光度计。 实验原理 （一）肝糖原的提取、鉴定 糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。 实验原理 （二）肝糖原的鉴定 糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。 CuSO4+2NaOH ═ Na2 SO4+Cu(OH)2↓ 2Cu(OH)2+ C6H12O6 ═ 2CuOH+氧化型葡萄糖+H2O 2CuOH ═ Cu2O↓(红色)+H2O Cu(OH)2 ═ CuO↓(黑色)+H2O 实验原理 （三）肝糖