我看到園子里很多战友求助关于树突状细胞的培养问题.docVIP

‘我看到园子里很多战友求助关于树突状细胞的培养问题，倾情奉上我培养的方法，对新手朋友也许有所帮助：1. C57Bl/6小鼠2. 处死小鼠，75%酒精浸泡10min3.解剖取出小鼠股骨和胫骨4.取出骨上组织5.冲洗骨髓腔，直至骨变白6.收集的细胞沉淀一10000/ml接种，培养液含200U/mlrmGM-CSF和IL-4  HYPERLINK /upload/2009/04/07jpg \t _blank HYPERLINK javascript:void(0) \t _blank 1 隔天换液并补充细胞因子，到第三天的时候如图：可以见到出芽状的突起，突起还不是特别多，也不是很长  第8天的时候，细胞形态已经出来，如图所示：  细胞形态具有典型的树突状细胞形态，长长的突起，到这个时候细胞已经比较成熟了，补充一下：第七天半量换液的时候，加入TNF-a刺激细胞成熟 嗯我是根据1999年lutz的方法，当然做了一些改进，培养DC很多人用的是高浓度的细胞，高浓度的因子，但是这样产量不高，我每一次分离一只小鼠的骨髓，大约可以得到10E+7个细胞，分成10盘，每盘10ml培养基，用低浓度的细胞因子，这样可以大大提高产量，每次能培养得到1*10E+7个DC左右，流式细胞术检测：细胞纯度应该大于90%，这个方法还是很好用的。  HYPERLINK /u