叶绿体的分离和荧光染色王德祥.docxVIP

叶绿体的分离和荧光染色姓名 王德祥 学号 201417140003 班级 2014生物基地同组者 徐文红 马慧达 孙法家实验目的通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。实验原理分离 差速离心 利用不同的离心速度所产生的不同离心力，将各种质量和密度不同的亚细胞组分和各种颗粒分开。沉降的顺序为：细胞核、线粒体和叶绿体、溶酶体和过氧化物酶体、内质网和高尔基体、核糖核蛋白复合体。由于各种细胞器在大小和密度上可能相互重叠。一般差速离心2-3次，分离效果会好一些。差速离心只用于分离密度和大小悬殊的细胞或细胞器，并且得到的产物纯度较低。若对产物纯度的要求较高，则需要密度梯度离心来分离纯化。密度梯度离心 将要分离的细胞组分小心的铺放在含密度逐渐增加的、高溶解性的惰性物质（如蔗糖）所形成的密度梯度溶液表面，通过重力或离心力的作用使样品中不同组分以不同的沉降率沉降，形成不同的沉降带。各组分的沉降率与大小、形状有关，通常以沉降系数S表示。密度梯度离心可分为速度沉降和等密度沉降，常用介质有蔗糖和氯化铯。速度沉降主要用于分离密度相近而大小不一的细胞组分。将要分离组分放在蔗糖浓度梯度溶液上层，各组分根据大小以不同速度沉降，形成不同沉降带。等密度沉降用于分离不同密度的细胞组分。细胞组分在连续梯度的高密度介质中经离心场力长时间作用