微生物生态学-11基因工程菌的标记与跟踪课件.pptVIP

基因工程菌株的标记与跟踪 GFP基因 1、绿色荧光蛋白的来源 荧光现象在许多海洋无脊椎动物中普遍存在着。许多刺胞亚门的动物（绿色荧光）和几乎所有栉水母类的动物（蓝色荧光）在受到刺激时都可以发出荧光。 1962年，Shimomura和Johnson等人首先从水螅水母类动物Aequorea Victoria中分离、纯化出一种荧光物质，称为绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Proteins，GFPs)。 目前研究得较为深入的是来自多管水母科(Aequorea)和海紫罗兰科(Renilla)的荧光蛋白，即Aequorea GFP和Renilla GFP (A-GFP和R-GFP）。 2、GFP的特性： A-GFP是球状的蛋白质，分子量为27-30KDa的单体，最高吸收峰为395nm，肩峰为473nm，发射光谱是λmax=508-509nm。 生色团的形成首先是Gly67的氨基对Ser65的羰基亲核进攻而环化成五元环，同时失去一分子水形成咪唑基。在有氧条件下，新的N=C双键促进Tyr66的α、β-氧化脱氢，从而形成一个连续的π电子芳香族系统-生色团。 3 荧光特性 首先，仅以蓝光或紫外光照射GFP就能激发其荧光，并不需要外加任何底物或共作用因子；荧光稳定，不易衰退，只有在过热(65℃)、过酸(pH4)、过碱(pH12-13)或其它变性剂(如6M胍基盐酸)存在的条件下GFP才会