实验六植物体内脯氨酸含量的测定解读.ppt

下次考试要求 期末考试内容根系活力测定，考试时间4小时，当堂交实验报告，期末考试占30% ，平时占70%。 必须带学生证备查，带坐标纸、计算器，不得以任何理由调课，缺席者按旷考处理，病假上交医院盖章的证明，事假上交所属学院主管教学院长签字并盖学院章的假条，自己去教务处办理缓考手续，其他个人、部门的签字或盖章一律无效！ 若发现替考者本门课程两人成绩均为0，并上交有关部门处理！ 植物体内游离脯氨酸的测定 在逆境条件下，植物体内游离脯氨酸的含量可比正常增加10~100倍。 2.大量积累时不会导致细胞内酸碱失调；游离脯氨酸的毒性最低；溶解度大，适合于用来保持原生质与环境的渗透平衡。 脯氨酸特点 ? 作为渗透物质，维持渗透平衡。 ? 增强蛋白质的水 合作用和可溶性，减少蛋白质的沉淀，保护蛋白质结构和功能的稳定。 脯氨酸在抗逆中的作用 植物体内游离脯氨酸用磺基水杨酸提取 提取植物样品时，脯氨酸游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯萃取，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下比色，从标准曲线上查出脯氨酸的含量。 氨基酸检测原理 还原型茚三酮 水合茚三酮 二酮茚–二酮茚胺 1.游离脯氨酸提取：植物体内的游离脯氨酸可以用3%的磺基水杨酸提取。 称取新鲜和萎蔫小麦叶片各0.5g，将称好的样品放入具塞试管中，加入5ml 3%的磺基水溶液，将试管浸入沸水浴中提取15min。 实验步骤 样品提取液的处理方法与标准浓度的脯氨酸系列溶液的方法相同，可以一起显色并测定。 吸取待测上清液2ml。 管号 1 2 3 4 5 6 标准脯氨酸量（ml） 0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 H2O (ml) 2 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 脯氨酸含量（μg） 0 4 8 16 24 32 2.制作标准曲线 脯氨酸母液浓度：20μg/ml 在样品和标准各溶液中分别加入冰醋酸和酸性茚三酮各2ml。摇匀后，沸水浴加热30min，冷却至室温，加入5ml甲苯，充分摇动，以萃取红色产物。 萃取完后，避光静置40min以上，待完全分层后，用吸管吸取甲苯层，用分光光度计在520nm波长下测定消光值。调零？ 最快的一组先测定，确定稀释倍数。 以脯氨酸含量为横坐标，吸光值为纵坐标，　 　绘制标准线。 脯氨酸（%）＝X ? C?（V/a）/(W?106) ?100 式中：X=稀释倍数 C＝从标准曲线上查得脯氨酸μg数； 　　　V＝提取液总体积（ml）； 　　　a＝测定时取提取液ml数； 　　　W＝样品干重（g）, 106将g换算为μg 移液管勿乱用！！ 加热时用保鲜膜将试管口封好。 用杯子端试管。 注意事项 试管多少支12支(7标准+4样品+1稀释)？ 1. 对数据的比较、分析讨论？ 2. 对实验设计的讨论？ 讨 论 * * 在水分亏缺情况下，植物要维持正常的生理活动过程，细胞就必须具有一定的膨压。ψP=ψw _ψs 当水势下降时，要维持细胞膨压不变，只有使渗透势下降。细胞渗透势的可溶性物质分为两类：由外界环境进入细胞内的各种无机离子，如K+、Cl-等； 细胞自身合成的有机物，主要是脯氨酸和甜菜碱 * 在干旱和盐渍条件下，植物体内脯氨酸含量可增加十倍甚至上百倍。原因是脯氨酸的合成受激而氧化抑制，蛋白质的合成受阻而水解加强 * * 磺基水杨酸对脯氨酸有特定的反应。 * * * * * * * * * * 在水分亏缺情况下，植物要维持正常的生理活动过程，细胞就必须具有一定的膨压。ψP=ψw _ψs 当水势下降时，要维持细胞膨压不变，只有使渗透势下降。细胞渗透势的可溶性物质分为两类：由外界环境进入细胞内的各种无机离子，如K+、Cl-等； 细胞自身合成的有机物，主要是脯氨酸和甜菜碱 * 在干旱和盐渍条件下，植物体内脯氨酸含量可增加十倍甚至上百倍。原因是脯氨酸的合成受激而氧化抑制，蛋白质的合成受阻而水解加强 * * 磺基水杨酸对脯氨酸有特定的反应。 * * * * * * * *