第8章(2013.09)要点.doc

神经干细胞的诱导分化 孙晓谦 赵明光 概述 目前神经干细胞（neural stem cellsNSCs）的分离体外培养已经取得可喜的进展，但无论是体外还是体内研究的结果NSCs分化为神经元的比例都明显低于胶质细胞致使难以达到理想的替代因损伤和发育缺陷等原因造成的神经元缺失的目的。究其主要原因是目前对NSCs分化的机制还不十分清楚因此不能对各类神经系统疾病的治疗做到有的放矢。 细胞分化首先是基因选择性地表达各自特有的专一性蛋白质而最终导致细胞形态、结构与功能的差异。在脑的发育过程中，NSCs增殖、迁移分化为特定的细胞系。目前已经明确成体中枢神经系统中存有NSCs，其向神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞等神经胶质谱系分化是由特定的信号级联决定的这种信号级联调节不同转录因子的活化，且有多种细胞因子和化学物质参与调节NSCs增殖、迁移和分化。 NSCs的分化可能存在细胞自身基因调控和外来信号调控两种机制。许多转录因子参与细胞基因的调控，转录因子在特定时间通过某一途径被启动后，引起或关闭下游基因的表达，决定着NSCs的分化命运同时，同一来源的NSCs移植到不同部位后，其分化结果也不相同，但往往与接受移植部位的细胞相似，提示外来信号调控作用的重要性。充分了解NSCs的分化调控机制对于其在神经科学方面的应用尤为重要。 图 8-1 干细胞的分化 神经的诱导作用 1924年，Mangold和Spemann在两栖类动物体内，从原本属于原肠胚的组织中切取少量细胞移植到受体胚胎的腹侧区。令人惊讶的是，移植物在该位置上存活并生长，并发育出一段神经管和一个轴向中胚层，即脊髓和体节。后期通过对不同类型移植物进行相应的染色可以鉴别出相应的受体细胞，因此推断，被移植的细胞不会自发形成神经外胚层，而是形成背侧的中胚层。“组织者”借助诱导因子以信号连接的方式使相邻的宿主组织生成子代神经组织，神经诱导现象由此发现。 移植后的神经诱导是由背侧中胚层对分泌因子进行应答反应所形成，该分泌因子源自信号中心。经推测是一个叫做背侧内胚层的临近位置，在两栖类动物中被称为Nieuwkoop中心。在非洲爪蟾属类生物中，Nieuwkoop中心形成于VegT、Vg1和节点相关蛋白及β-连环蛋白的表达。Spemann和Mangold的实验可以预测到，神经诱导物质来自“组织者”。虽然一些研究试图找出这些神经诱导物质，但最近的工作仅仅得出这样一种假设：表皮的形成需要短距离的细胞间的信号转导；这类信号的缺失，引发神经组织的形成。然而，能与这些信号相互干扰的物质均为TGF-β家族的一员，例如TGF-β、节点相关蛋白和骨形态发生蛋白roteins，BMPs）。随后，相类似的神经诱导现象又在斑马鱼、鸡和小鼠等生物胚胎中被发现。研究表明，神经诱导是一个脊椎动物在神经系统发生发展中尤为关键的一步。 鉴于这一里程碑式的发现，人们意识到诱导因子在脊椎动物胚胎的神经组织发生发育中起具有关键性的诱导作用，随后大量的研究工作集中在了解相关诱导因子的功能与类型。此外，许多参与表达启动神经诱导信号的转录因子也逐渐被识别出来。在胚胎中，这些因素相互协调诱导神经平稳发展。 神经干细胞诱导分化的有关因素 目前对NSCs的分离、培养纯化等已有较成熟的技术，而对于NSCs的定向诱导分化，虽已知有多种细胞因子参与其中，但仍缺乏精确的调控方法。现在得到的共识是，NSCs的增殖或定向分化是由其自身基因信号和局部微环境共同调节的，二者互相作用，彼此补充，共同作用于NSCs。 基因调控 基因调控是指NSCs自身的转录因子及其他功能蛋白对其发育的调控。许多转录因子参与了NSCs的增殖分化过程。基因调控对NSCs的增殖分化至关重要，特别是不同发育分化阶段主要调控基因决定着NSCs向所需功能的神经细胞分化。基因的表达受到其自身固有分子程序的调控和周围环境的影响，其途径主要有体外与体内体外研究主要是在各种外环境条件诱导刺激下研究基因对NSCs增殖和分化的影响体内研究主要通过基因转导与基因敲除，检测基因在NSCs分化方向上的作用。 碱性螺旋-环-螺旋 (basic helix-loop-helix，bHLH) 其编码的bHLH蛋白在N端近个氨基酸的片段内具有特征序列模式：helix-1oop-helix模体，及其上游短的富含碱性氨基酸顺序。bHLH基因是决定神经细胞分化命运的功能基因在bHLH基因家族中，Ngn 1、Ngn 2和 Mash 1在神经细胞谱系的决定中具有重要作用在发育的哺乳动物大脑中，Ngn l和Ngn 2仅在神经发生时期脑室区神经上皮前体细胞中表达，均与普遍存在的bHLH蛋白形成二聚体，后者通过碱性区域与带负电荷的DNA序列结合，从而启动组织特异基因表达，促使干细胞向神经元方向分化。 核