叶绿体的分离及荧光观察.pptVIP

叶绿体的 分离及荧光观察 目的要求 实验原理 实验用品 实验方法 观 察 思考题 * * 通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞器分离的一般原理和方法。 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光, 并熟悉荧光显微镜的使用方法。 将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行, 以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。 材料：菠菜叶片。 试剂：碳酸钙、丙酮、甲醇、  醋酸酮、氢氧化钾、乙醚、盐酸。 器材：研钵、移液管、吸球、天平、分液漏斗、量筒、试管。 一、叶绿体的分离与观察 1. 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。 2. 利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀浆3～5min。 3. 将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。 4. 取滤液4ml在1000r/min下离心2min。弃去沉淀。 5. 将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清液，沉淀即是叶绿体(混有部分细胞核)。 6. 将沉淀用0.35mol/LNaCl溶液悬浮。 7. 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在普通光镜和荧光显微镜下观察。 (1)在普通光镜下观察。 (2)在荧光显微镜下观察叶绿体的