荧光定量PCR定量的理论依据五、荧光定量PCR定量的理论模式六.ppt

;目录;一、背景知识;2、1992 年，Higuchi最早提出了实时PCR 的设想，它的基本思想是利用荧光染料EB（溴化乙锭）可以插入到双链核酸中受激发光的性质，在PCR反应的退火或延伸时检测掺入到双链核酸中EB的含量就能实时监控PCR反应的进程，根据PCR反应的数学函数关系，结合相应的算法，通过加入标准品的方法，就可以对待测样品中的目标基因进行准确定量。（陈旭等，2010）;; 二、荧光定量PCR概述;;;; 三、荧光定量PCR的主要原理; 四、荧光定量PCR定量的理论依据; （3）、理论上PCR扩增效率为100%，但实际上：DNA的每一次复制都不完全，实际应为： Y=X×(1+E)n，其中E代表扩增效率，通常E≤1通常X在1~105拷贝、循环次数n ≤30时，E相对稳定，原始模板以相对固定的指数形式增加，适合定量分析，这也就是所谓的指数期；随着循环次数的增加，E值逐渐减少，Y呈非固定的指数形式增加，最后??入平台期。 ;五、荧光定量PCR定量的理论模 式; （2）、荧光定量PCR能相对准确的定量PCR， PCR扩增通式：① Tn=T0（1+E）n ② Tn=Tn-1（1+E）