漫谈绿色荧光蛋白.PDFVIP

第 23卷 　第 6期 大 学 化 学 2008年 12月 今日化学 漫谈绿色荧光蛋白2 ———2008年度诺贝尔化学奖 赵培 　张俊龙 (北京大学化学与分子工程学院 　北京 100871) 　　摘要 　2008年诺贝尔化学奖授予了 O. Shimomura,M. Chalfie和 R. Y. Tsien 3位科学家 ,彰显他 们为绿色荧光蛋白 ( GFP)的发现 、表达及应用作出的突出贡献 。本文简要介绍了 GFP的基本结 构、发光机制及其发现和发展的过程 。 　　众所周知 ,在 20世纪 ,生物化学已用于研究活体细胞内的新陈代谢的基本原理 。随着晶 体学和核磁共振的发展 ,蛋白质结构以原子尺度的水平呈现 ,推动了对于酶结构和功能更深层 次的认识 。然而 ,由于一直未能找到适当的定量测量工具在分子水平上准确地监测细胞内和 细胞间的过程 ,以至于无法进一步详细说明这些生命系统中的动态行为。 　　在北美西岸的“星期五港湾 ”( Friday Harbor) ,一种名为 A equorea victoria的水母在受到刺 激时 ,周边组织 (“伞缘 ”)会发出绿色的荧光 ;它不仅仅照亮了自己身边的环境 ,也照亮了人们 在分子水平上研究和监测细胞内与细胞间动态过程的道路 。这种发出绿色荧光的物质就是绿 图 1　来自水母中的绿色荧光蛋白 图片来源 : http: / /www. conncoll. edu /ccacad /zimmer/GFP ww / shimomura. htm l 1 2 色荧光蛋白 ( Green Fluorescent Protein, GFP) (图 1) 。它与萤火虫发出荧光的机制不同 :萤火 虫依赖底物分子荧光素 ( luciferin) ,由荧光酶 ( luciferase)催化产生荧光 ; 而绿色荧光蛋白本身 发光 ,无需底物 。GFP中的发色团是由其一级结构中的一段三肽自然形成的。该三肽发色团 的形成只需要氧气 ,不依赖于酶或者其他辅助因子的存在 ,因此在生物体内每一个被表达的地 方都会“自动 ”出现。 GFP的荧光极其稳定 ,在激发光照射下 , GFP的抗光漂白 ( Photobleach ing)能力比荧光素 ( fluorescein)强很多 ,特别是在 450～490nm 的蓝光波长下更为稳定。作为 一种广泛应用的活体报告蛋白 ( reporter) , GFP和它的相关变种 (mutants)可以提供一种具有普 适性的基因标记 ,其作用是任何其他酶类报告蛋白无法比拟的 [ 1 ] 。 　　在 21世纪初 , GFP作为一种新的工具得到了迅速发展。当我们在 W eb of Science中输入 “GFP”时就可以发现 ,在 1994年后 ,与 GFP相关的研究成为生物化学领域新的热点 (图 2) 。 利用 GFP可以在时间和空间上监测活体细胞和生命有机体的很多现象 ,比如基因表达 ,蛋白 质定位及其动态过程 ,蛋白质间的相互作