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PCR的种类和应用
PCR的种类及应用; ;*;*;*; Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌，能在70-75℃生长.存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)的嗜热DNA聚合酶，可在74℃复制DNA，在95℃仍具有酶活力。该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延伸引物，合成双链DNA。这个酶只有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→3′的外切酶活性，缺少3′→5′的外切酶活性。 ;*;PCR 操作过程;引物设计;PCR的各种变体;原理：扩增引物相反方向DNA?序列的技术。用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段，而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段.实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切，然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接，再用一对反向的引物进行PCR，其扩增产物将含有两引物外未知序列，从而对未知序进行分析研究.? ;1. 用一种在靶序列上没有切点的限制性内切酶 消化大分子量的DNA 2. 产生的大小不同的线性DNA片段群体，其中具靶DNA区段的DNA分子长度不超过2-3Kb,经连接后环化成环状分子;应用：; 就像任何DNA一样，PCR的双链DNA产物也可以供序列测定使用。 然而，按照Sanger双脱氧末端链终止法测定DNA的核苷酸序列，最好是使用单链模版DNA。 现在已经发展出了一种专门用于制备单链DNA的技术—不对称PCR技术。
这种技术，除了使用的两种引物浓度相差100倍以外，其他的方面跟常规PCR技术没有什么本质的区别。
;基本原理：;;;;荧光定量PCR(Q-PCR);;; 分子信标（molecular beacon）是一种呈发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，因此标记在一端的荧光基团与标记在另一端的淬灭基团紧紧靠近。;Q-PCR的应用;RT-PCR;巢式PCR ;;Touchdown PCR;*;*;*;谢谢
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