第八章 高效液相色谱法幻灯片.ppt

第八章 高效液相色谱法;第一节 液相色谱仪器（high performance liquid chromatograph）;液相色谱仪（2）;液相色谱仪（3）;液相色谱仪（4）;Agilent 1100系列高效液相色谱系统 ;二、高效液相色谱法的特点 （feature of HPLC）;?高效液相色谱法与经典液相色谱法;;液相色谱以液体为流动相，固定相可以是固体或液体（担载在固体表面），与气相色谱比，带来一系列变化： 例如，填充柱气相色谱柱，一般填料的尺寸为80-100目，粒度大约是2毫米，而一般高效液相色谱的固定相粒度在2－10微米，因此流动相通过这样一段固定床时就产生了很高的反压。;由于液体与气体性质的以下差异： 溶质在液体中的扩散系数比它在气体中小105倍左右 液体粘度比气体约大102倍 液体表面张力比气体大104倍左右 液体密度比气体约大103倍 液体不可压缩;因此，我们通常所说的高效液相色谱，实际也是高压液相??谱，因为没有很高的压力就不可能产生很高的分离效率。;三、流程及主要部件 （process and main assembly of HPLC）;2. 主要部件;(2)梯度淋洗装置;(3) 进样装置;(4) 高效分离柱;(5) 液相色谱检测器;一些常用溶剂的紫外截止波长;b. 光电二极管阵列检测器;;光电二极管阵列检测器;c. 示差折光检测器（differential refractive index detector）;示差折光检测器;d. 荧光检测器（fluorescence detector）;§17-2 基本理论;三 速率方程;流动相流速对板高的影响;硅胶－强极性 氧化铝－弱极性 活性炭－非极性 分子筛－强极性 高分子多孔微球(GDX); 吸附剂一般为多孔性的物质，在它们的表面存在着分散的吸附中心，溶质分子和流动相分子在吸附剂表面的活性中心上进行竞争，同时不同溶质之间和同一溶质的不同官能团之间也存在竞争。竞争的综合结果就是形成不同溶质在吸附剂表面吸附、解吸平衡。;;吸附色谱的分离机理;硅胶表面结构;硅胶表面结构经热处理发生的变化;缺 点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾。;极性吸附剂上有机化合物的保留顺序如下： 氟碳化合物<饱和烃 <烯烃<芳烃<有机卤化物<醚<硝基化合物<腈<叔胺<酯醛酮<醇<伯胺<酰胺<羧酸<磺酸;3 流动相(洗脱剂);硅胶固定相分离苯，甲苯，乙苯，丙苯，丁苯;4 应用; 吸附色谱概述;二 分配色谱法;分配色谱的分离机理;;固 定 相： 早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相： （将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶 （担体）表面的游离羟基上。 如 C-18柱（反相柱）。（详见后面） ;分配色谱概述;1 固定相;2 流动相;各种阴离子在阴离子交换剂上的滞留次序：;阳离子交换树脂;4 应用;离子交换树脂的分离机理;离子交换色谱概述;四、离子色谱  （ion chromatography）;二、离子色谱仪器;离子色谱基本原理 离子色谱中发生的基本过程就是离子交换，因此，离子色谱本质上就是离子交换色谱。; 在离子色谱的基本组成中，重要的和与其他高效液相色谱不同的就是抑制器和电导检测器。;;;自动连续再生阴离子抑制器中电化学反应和离子移动;五、离子对色谱 （ion pair chromatography）;阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁 基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子； 阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸 钠作为对离子； 反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18 柱)，含有对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为 流动相，试样离 子X-进入流动相后，生成疏 水性离子对Y+X - 后；在两相间分配。 ;六 尺寸排阻(凝胶)色谱法;体积排除色谱的分离机理;2 固定相;凝胶色谱概述;分离方法的选择;七、亲和色谱(AC) （Affinity chromatograph）;第三节 液相色谱的固定相与流动相;（2）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体）30～40μm的玻 璃微球，表面附着一层厚度为1～2μm的 多孔硅胶。 表面积小，柱容量底；;二. 化学键合相色谱; 存在着双重分离机制： (键合基团的覆盖率决定分离机理) 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主； 缺点∶ pH值不能小于3 ;1. 键合固定相制备; 化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用广； c. 硅碳键