柴胡有效成分提取工艺的研究.docVIP

　　柴胡有效成分提取工艺的研究 作者：肖功胜，杨云，孙维英，冯云霞，朱振华 【摘要】 　　目的确定柴胡有效成分提取的最佳工艺。方法以柴胡中挥发油吸收度和柴胡皂苷a的含量为指标，采用单因素实验筛选主要因素和水平，再以正交实验筛选柴胡有效成分提取最佳工艺。结果最佳工艺参数为40℃温浸，收集相当于药材2倍量蒸馏液，继用8倍量含5%氨水的95%乙醇回流1 h提取柴胡皂苷，可使挥发油吸收度达0.941，柴胡皂苷a的含量达0.32%。结论该工艺为柴胡有效成分的提取提供了可靠依据，且工艺条件稳定可靠，重复性好。 【关键词】 提取工艺 柴胡皂苷a 挥发油 正交实验 　　Abstract：ObjectiveTo determine the optimum technology of active ingredients from Bupleurum chinense DC.MethodsETTLER AE240 电子 分析天平（瑞士）。 　　1.2 试药柴胡药材购于河南省药材公司，经本院陈随清教授鉴定为伞形科植物柴胡 Bupleurum chinense DC.的干燥根；柴胡皂苷a对照品自制，经峰面积归一化法测定含量为：99.91% ；乙腈为色谱纯；水为双重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。 　　 2 方法 　　2.1 单因素实验 　　分别以药材浸渍温度、浸渍时间、料液体积比、蒸馏液收集量等为因素，在不同水平下进行单因素实验，筛选出影响柴胡挥发油提取的主要因素和水平，同样分别以乙醇浓度、pH值、柴胡皂苷提取时间、料液体积比等为因素，在不同水平下进行单因素实验，筛选出影响柴胡皂苷提取的主要因素和水平。从而为正交实验设计提供依据。 　　2.2 挥发油的提取和测定方法随机称取50 g柴胡干燥粗粉，置于500 ml圆底烧瓶中，采用水蒸气蒸馏法在不同条件下提取柴胡挥发油，收集蒸馏液，加3%丙二醇摇匀，精密量取上述蒸馏液2 ml两份，一份置5 ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，作为样品液，另一份置蒸发皿中，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，转移至5 ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，作为空白。用752紫外分光光度计在277 nm波长处测定蒸馏液中挥发油的吸收度。 　　2.3 柴胡皂苷的提取取提取挥发油后的药渣，滤干，置于500 ml圆底烧瓶中，在不同条件下回流提取柴胡皂苷，过滤得滤液，减压低温浓缩成每毫升含0.5 g柴胡的浓缩液，备用。 　　2.4 柴胡皂苷a 含量测定 　　2.4.1 色谱条件大连伊利特C18(4.6 mm×250 mm,5μm)；流动相为乙腈-水37∶63；流速1 ml/min；检测波长208 nm；柱温35℃；进样量20 μl。 　　2.4.2 对照品溶液的制备精密称取柴胡皂苷a对照品5.09 mg，加甲醇溶解并定容至10 ml，摇匀，配成0.509 mg/ml对照品溶液，冷藏备用。 　　2.4.3 供试品溶液的制备取上述浓缩液10 ml减压蒸干，加20 ml甲醇溶解残渣，过滤得滤液。再取2 ml滤液至10 ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，冷藏备用。 　　2.4.4 线性范围考察精密吸取对照品储备液2.0，6.0，10.0，14.0，18.0 μl，在“2.4.1”项下色谱条件下进样测定，记录峰面积，以峰面积积分值Y为纵坐标，对照品溶液进样量X（μl）为横坐标，进行线性回归（n=5）， 得线性回归方程为Y=209 413.7X－162 379.4，线性范围为0.972 0～9.635μg，相关系数为r=0.999 7，线性关系良好。 　　2.4.5 精密度实验 　　精密吸取对照品20 μl，在“2.4.1”项下色谱条件下重复进样5次测定，记录峰面积，RSD为1.5%（n=5），表明精密度良好。 　　2.4.6 稳定性实验 　　将供试品溶液在室温下贮存，在“2.4.1”项下色谱条件下，分别于0，2，4，6，8h进样测定，记录峰面积，RSD为2.0%，表明样品在8 h内稳定。 　　2.4.7 重复性实验 　　精密称取同一批样品5份，按供试品溶液处理方法制备样品溶液，在“2.4.1”项下色谱条件下重复进样测定5次，记录峰面积，RSD为2.1%（n=5）。 　　2.4.8 样品测定精密吸取20 μl样品溶液，在“2.4.1”项下色谱条件下进样测定，记录峰面积， 计算 各样品中柴胡皂苷a的含量。 　　2.5 正交实验以柴胡蒸馏液中挥发油的吸收度和柴胡皂苷a的含量为检测指标，参照单因素实验结果，分别以药材浸渍温度、挥发油收集量、柴胡皂苷提取时间、柴胡皂苷提取溶剂料液比等主要因素及不同水平进行L9(34)正交设计，筛选最佳工艺。正交实验因素和水平见表1。表1 正交实验因素及水平（略） 　　 3 结果 　　3.1 浸渍温度对挥发油提取效