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Foxp3siRNA特异性抑制肝癌患者调节性T细胞进而增强抗肿.doc 13页

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Foxp3siRNA特异性抑制肝癌患者调节性T细胞进而增强抗肿
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Foxp3siRNA特异性抑制肝癌患者调节性T细胞进而增强抗肿瘤免疫应答的体外实验研究张恒辉,费然,谢兴旺,王莉,罗昊,王雪艳,魏来,陈红松北京大学人民医院,北京大学肝病研究所北京100044张恒辉,男,1979-11-03月生,助理研究员.主要研究方向为肝炎及肝癌的免疫治疗。项目资助:国家自然科学基金资助项目No.30772499;教育部博士点新教师基金,编号:200800011091;教育部新世纪人才计划,编号:985-2-099-113;北京大学人民医院研究发展基金,RDB2008-04通讯作者:[email protected][摘要]目的:RegulatoryTcells,Treg),评价Foxp3siRNA干扰后对Treg表型及抑制功能的影响以及是否能上调肝癌患者抗肿瘤免疫应答的能力。方法:Treg。通过实时定量PCR以及流式细胞术分析Foxp3siRNA对Treg中Foxp3表达的抑制效能,并通过流式细胞术评价Foxp3siRNA干扰后对Treg表面分子CD127,CTLA-4、GITR的表达以及对CD4+CD25-T细胞的抑制作用。通过酶联免疫斑点法(Elispot)以及五聚体(pentamer)分析法评价Foxp3siRNA干扰肝癌患者Treg后对经肿瘤特异性抗原NY-ESO-1b诱导的肿瘤特异性免疫应答的影响。结果:通过Foxp3siRNA的转染可实现对TregFoxp3表达的部分沉默,并且上调Treg表面CD127分子的表达,下调CTLA-4和GITR的表达。肝癌患者TregFoxp3表达的沉默可下调Foxp3+Treg对CD4+CD25-T效应性细胞增殖抑制的能力;经Foxp3特异的siRNA干扰后肝癌患者Treg抑制肿瘤抗原特异性的CTL的能力显著减弱,Foxp3siRNA以及siRNA-control转染组NY-ESO-1157-165特异性的CTL的数量分别为(0.21%±17%VS.0.57%±0.39%,P<0.05),与siRNA-control进行干扰的肝癌患者组相比Foxp3siRNA干扰后的Treg与特异性CTL共培养后,肿瘤特异性CTL数量及分泌的IFN-r的数量显著上调(132±55VS.27±11,P<0.05)。结论:通过Foxp3siRNA对于肝癌患者Treg中Foxp3表达的沉默,在体外实现了对靶细胞Treg表型及功能的干扰,从而在一定的程度上增强了肝癌患者肿瘤特异性抗原所诱导的抗肿瘤免疫应答的能力。关键词: ThespecificsuppressioninregulatoryTcellsbyFoxp3siRNAcontributedtoenhancetheanti-tumorimmuneresponseinhepatocellularcarcinomapatientsinvitroHeng-HuiZhang,RanFei,Xing-WangXie,LiWang,HaoLuo,Xue-YanWang,LaiWei,Hong-SongChenHepatologyInstitute,PekingUniversity,People’sHospital,No.11XizhimenSouthStreet,Beijing100044,China.Correspondenceto:Hong-SongChen,Professor,HepatologyInstitute,PekingUniversity,People’sHospital,No.11XizhimenSouthStreet,Beijing100044,[email protected]:Accepted:AbstractObjective:TodesignthesuitablesequencesiRNAofFoxp3tointerferingthefunctionofTregandevaluatewhetherthesuppressionofTregcouldenhancetheanti-tumorimmuneresponseinhepatocellularcarcinomapatientsornot.Methods:Foxp3-specificsiRNAsbychemicalsynthesiswasdeliveredintoregulatoryTcells.TheinhibitionefficienciesofFoxp3-specificsiRNAswereevaluatedbyreal-timePCRandfluorescentlystainedforintracellularFoxp3andanalyzedusingmultiparameterFCM.

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