第四章续2微生物学新技术在环境工程中的应用.ppt

* 第四章 微生物学新技术在环境保护 中的应用 微生物学新技术 遗传诱变育种 基因工程 酶工程 微生物制剂 生物表面活性剂 第一节 固定化酶和固定化微生物在环境工程中的应用 酶是由细胞产生的能够催化生物化学反应的活性物质。酶在微生物细胞内能够发挥作用，将它提取出在体外也能发挥作用。酶制剂广泛应用于食品加工、发酵工业、印染退浆、生丝脱胶、制革、化妆品、污废水生物处理、废气生物净化等。 一 酶制剂剂型 （一）干燥粗酶制剂 将培养液除菌（或不除菌）后与淀粉等惰性填料混合、烦躁制成粗酶。 （二）稀液体酶制剂 将培养液过滤除去菌体杂质后直接加入稳定剂和防腐剂。 （三）浓液体酶制剂 将培养液过滤除去菌体杂质后浓缩，加入稳定剂和防腐剂。 （四）结晶酶 将酶浓缩、去杂质、纯化后在适当的温度、pH下加入铵盐或有机溶剂使其析出结晶。 （五）固定化酶 将酶和酶菌体固定在载体上，制成不溶于水的固态酶，可以较长时间使用。 二 酶的提取 （一）预处理 ①胞外酶：将液体培养液过滤或离心除去菌体，所得的清夜即粗酶液。如果是固态发酵，用水或缓冲液浸泡，在离心或过滤除去菌体和杂质后得到粗酶液。 ②胞内酶：破碎细胞壁和质膜，制成无细胞提取液。 （二）酶的提取 由于不同的酶的等电点、pH、温度稳定性等性质不同，提取方法也不同。 1 水溶液 提取法 2 表面活性剂提取法 3 丁醇提取法 （一）浓缩 葡聚糖凝胶—分子筛浓缩法、聚乙二糖浓缩法、超滤膜浓缩法、盐析或乙醇沉淀后分离。 （二）去杂质 pH沉淀法、利用蛋白质热变性的温度差异、蛋白沉淀剂法。 （三）纯化 盐析法、有机溶剂沉淀法、层析法。 （四）结晶 当酶达到一定纯度后，在适当的温度下、pH下，逐渐加入(NH4)2SO4溶液，酶可以慢慢析出结晶，也可以加入某些有机溶剂析出结晶。 三 酶的纯化 １.固定化酶：从筛选、培育获得的优良菌体中提取活性极高的酶，再用包埋法（或交联法、载体结合法、逆胶束酶反应系统）等方法将酶固定在载体上，制成不溶于水的固态酶，即固定化酶。 ２.固定化微生物：用固定酶的方法将酶活力强的微生物固定在载体上，即成固定化微生物。微生物本身是多酶体系的固定化载体，将整个细胞固定化更有利于保持原有活性。有死细胞固定化和生长细胞固定化两种。 ３.固定化酶和固定化微生物特性：性能稳定、降解有机物性能强、耐毒、抗杂菌、耐冲击负荷。 四 固定化酶和固定化微生物 水溶性酶 水不溶性载体 水不溶性 （固定化酶） 固定化技术 载体结合 交联法 包埋法 逆胶束酶 固定化酶 固定化技术 Ⅰ 载体结合法： 　　以共价结合、离子结合和物理吸附等将酶固定在非水溶性载体上。载体有葡聚糖、活性炭、胶原、琼脂糖、多孔玻璃珠、高岭土、硅胶、氧化铝、羧甲基纤维素等。 不溶性载体 酶 载体结合法 交联法： 将酶与两个以上的官能团的试剂反应形成共价键的固定方法。交联剂有：戊二醛、双重氮联苯胺和六甲撑二异氰酸酯。 交联法 固定化技术 Ⅱ 包埋法： 将酶包埋在凝胶微小格子（格子型）中，或将酶包裹在半透性的聚合物膜内（微胶囊型）的固定方法。格子型的包埋材料有聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、琼脂、硅胶等。微胶囊型的包埋材料有尼龙、乙基纤维素和硝酸纤维素。 包埋法（微胶囊型） 包埋法（格子型） 固定化技术 Ⅲ 表面活性剂 酶 缓冲液 逆胶束酶反应系统 逆胶束酶反应系统： 表面活性剂的两性分子在有机溶剂中自发形成聚集体，其亲水性一端连接成逆胶束的极性核，水分子插入核中，其疏水性的一端进入主体有机溶剂中，酶分子溶于逆胶束中，组成逆胶束酶系统。 固定化技术 Ⅳ 第二节 微生物细胞外多聚物的开发与应用 微生物的胞外多聚物（Extracellular polymers, ECP）是微生物在一定的环境条件下，在其代谢过程中分泌的、包围在微生物细胞壁外的多聚化合物。包括荚膜、粘液层及其他表面物质。这些多聚物其成分为脂、脂肽、多糖脂、中性类脂衍生物等。 微生物细胞外多聚物可用作表面活性剂、絮凝剂或助凝剂、沉淀剂。 生物表面活性剂和生物乳化剂是具有亲水基和疏水基结构于一体的两亲化合物。生物表面活性剂分子中具有脂肪烃链构成的非极性疏水基和有极性的亲水基，如磷酸根或多羟基基团。可以改变两相界面的物理性质，降低表面张力。生物乳化剂不能显著降低两相表面张力，但对油——水界面有很强的亲和力，能够吸附在分散的油滴表面，防止油滴聚集，从而