聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR） .pptVIP

PCR 的基本原理 条件——模板DNA（template），寡核苷酸引物(primer)，DNA聚合酶(polymerase)，合适的缓冲液(buffer)系统 过程—— DNA变性(denaturation)、退火（annealing）及延伸(extension)的温度与时间等 ——使目的DNA得以迅速扩增 Annealing（退火） Primer（引物）：两条寡核苷酸链；分别与待扩增的目标片段两端的序列互补。 Extension（延伸） 新合成的链又可作为下轮循环反应的模板。 Taq DNA Polymerase ①耐高温 ②高度的扩增片段特异性和扩增效率，增加了扩增长度(2.0Kb)。 引 物 (primer) 引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。 2. 保证引物中G-C比例为50%±15%，ATGC最好随机分布。 避免两条引物间或引物内部互补，特别是3’端的互补。 4. Length: 20bp左右 Ta（退火温度）=4× ( G+C) + 2×(A+T ) 保证每个引物的Tm值相匹配，且在70-75°C范围内。 5. 检测目的DNA序列看是否有错配区域，计算机程序分析可以帮助避免使用设计不合理的引物对。 (dNTPs) dNTP是dATP、dCTP、d