第五章dna体外重组技术-唐旭东-2013级-jian.pptVIP

概述 1. 质粒的特征 功能： 使宿主细胞具有抵抗不利自身生长因素的能力。 性质：具有不相容性 按拷贝数分类： 严谨性（低拷贝） 松弛型（高拷贝） 分子相对较小，具有较高的拷贝数 含高效的复制子，可用氯霉素阻止细菌蛋白质的合成，使质粒的拷贝数增加。 具有多种遗传选择标记，包括各种抗药基因或营养代谢基因等。 抗药基因或营养代谢基因 氨苄青霉素抗性基因（ampr）:编码β-内酰胺酶，水解amp β-内酰胺环使amp失效 四环素抗性基因（tetr）：编码转膜泵将tet从细胞移出 大肠杆菌LacZ基因：编码半乳糖苷酶，分解X-gal，使菌落变为蓝色。 α互补筛选法-（2’37’’） pUC18/pUC19 2. 质粒载体的分类: （2）表达用质粒载体： 除具备载体的必备条件外还应有用于外源基因表达的元件：如启动子、终止子等 分类： 原核表达载体 真核表达载体 （二） ?噬菌体 ?噬菌体作为载体具有两个特点 （三）粘粒载体（cosmid) 质粒序列：复制原点，抗性标志 噬菌体：cos粘端序列 插入片段长度可以是载体本身长度的7-10倍 二、DNA聚合酶 5′→ 3′聚合酶活性 3′→ 5′外切酶活性 5′→ 3′外切酶活性 二、DNA聚合酶