高压氧、地塞米松对大鼠超长随意皮瓣FGF-1和TGFβ-1表达量的影响.pdf

高压氧、地塞米松对大鼠超长随意皮瓣FGF －1及 TGFβ－1的影响 陈振雨，任纪祯，吴俐，苗嫄昕，朱月华，房晶 青岛大学医学院附属医院医学美容中心，山东青岛（266100 ） 摘 要：目的：探讨高压氧、常压氧对大鼠随意皮瓣成活率的影响。方法：Wister雄性大鼠 60只，随机分为三组，每组于背部中线形成一蒂在尾端的超长随意皮瓣（1cm×6cm ）， A 组不给于其他干预方式；B组术后即刻给予地塞米松5mg皮瓣下注射；C组术后当天开始每 天给予高压氧2次，每次1h，持续5天，第7天统一处理动物，计算皮瓣成活率。结果：术后7 天测量各组大鼠平均成活率分别为：对照组：（48.6±8.0 ）%;地塞米松组成活率(81±4.4)%； 高压氧组：(89.1±3.7)%; 组间差异明显，p0.05. 高压氧组和地塞米松组较对照组FGF －1 表达明显提高，但高压氧组与地塞米松组之间没有差异性，而TGFβ-1则三组均为阴性或弱 阳性，组间没有差异性。结论：高压氧与地塞米松均可以促进随意皮瓣的成活，但促进成活 的机理可能存在差异。 关键词：高压氧，常压氧，大鼠，随意皮瓣，FGF-1 ，TGFβ-1 传统上认为随意皮瓣的长宽比例不应超过(1.5～2) ∶1,为提高随意皮瓣的成活率,许多方 法被临床和基础实验研究所采用，如何能实现超长随意皮肤皮瓣的一次转移成功,是一个值 得研究的问题，如何能实现超长随意皮肤皮瓣的一次转移成功,是一个值得研究的问题，为 此我们想通过实验验证高压氧与地塞米松对随意皮瓣的作用及并监测皮瓣组织中FGF －1及 TGFβ－1的表达量变化。 1. 材料与方法 1.1 标本制作 1.1.1 实验动物分组 Wister雄性大鼠60只，由青岛大学医学院实验动物中心提供，体重400±20g ，鼠龄4个月， 健康。随机分为三组，每组于背部中线形成一蒂在尾端的超长随意皮瓣，约1cm×6cm大小， A组不给于其他干预方式；B组术后即刻给予地塞米松10mg皮瓣下注射；C组术后当天开始 每天给予高压氧2次，每次1h，持续5天。 1.1.2 随意皮瓣动物模型的制作 Wistar大鼠以10%水和氯醛按0.3ml/100g腹腔注射麻醉，麻醉生效后,俯卧位固定于 手术台上,背部剪毛,常规碘酊、酒精消毒,用龙胆紫于大鼠背部中央设计约1cm×6cm大小矩形 随意皮瓣，蒂在尾端，距髂后上棘约1cm，用刀沿划线切开皮肤达深筋膜浅层,锐性分离,掀 起皮瓣后,保留真皮下毛细血管网,皮瓣完全掀起后,彻底止血,然后用1－0丝线原位间断缝合， 青霉素20万单位腹腔注射，一日一次，连续3天。 1.2 观察指标 1.2.1 皮瓣成活面积，皮瓣坏死的判断标准：颜色变黑、质硬、无毛细血管反应。病理表现 为: 组织崩解、细胞核消失、炎细胞广泛浸润。在薄层病理切片的帮助下,用透明纸精确描绘 出整个皮瓣和坏死区域面积。坏死率= (坏死面积×100 %) / 皮瓣面积。坏死面积由数字式球 积仪( PLACOM KP280N) 自动测出。 -1- 1.2.2 组织学检查 在距离皮瓣蒂部3cm处取约1cm×0.5cm大小组织，以10 %甲醛固定3 d ,酒 精脱水,石蜡包埋,切片厚度5µm ,一组切片HE 染色,行常规病理学检查。另一组切片行免疫组 化检查。载玻片以多聚赖氨酸处理后,捞片,70 ℃烤箱内过夜,热脱蜡,在0.02 mol/PL 的枸橼酸 盐缓冲液中煮沸,修复抗原,PBS 冲洗, 山羊血清封闭抗原后,依次滴加鼠抗人CD105单克隆抗 体（购自美国Neomarkers Biotech公司）、兔抗人VEGF多克隆抗体、通用二抗、三抗工作液 (福州迈新试剂公司) ,DAB 染色, 观察FGF-1及TGFβ-1的表达情况，用颜色深浅示表达强弱， FGF-1及TGFβ-1的阳性表达较广泛，在血管内皮、皮脂腺、毛囊等处都可以表达，采用Simple PCI