日本血吸虫主要虫卵抗原Sjp40在感染新西兰白兔肝脏中表.PDF

·826 · doi 10.3969/j.issn. 1673-4254.2015.06.10 J South Med Univ, 2015, 35(6): 826-831 基础研究 日本血吸虫主要虫卵抗原日本血吸虫主要虫卵抗原SjSjpp4040 在感染新西兰白兔肝脏中的表在感染新西兰白兔肝脏中的表 达与免达与免疫定位疫定位 夏 丹，邓淦明，滕萍英，谢 郁，李耀民，王春梅，陈淑洁，陈敏芳，麦荣嘉，廖海燕，石玲玉，欧丽妍, 陈启伟，陈晓光， 周晓红 南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系//广东普通高校新发传染病防治重点实验室，广东 广州 510515 摘要：目的观察Sjp40 在感染新西兰白兔肝脏沉积虫卵及其肉芽肿病变形成中的表达情况，并进行免疫定位。方法 日本血吸 虫尾蚴感染新西兰白兔，收集未感染组、29 dpi 组和45 dpi 组肝脏，Trizol 法提取各组肝脏总RNA ，以日本血吸虫甘油醛-3-磷酸 脱氢酶（GAPDH）为内参，Taqman 探针qRT-PCR 检测Sjp40 mRNA 的表达；提取各组肝脏总蛋白，以硫酸铵盐析法和Protein G 免疫亲和柱层析法纯化的抗Sjp40-McAb 9G7 和抗弓形虫tSAG 1-McAb Y3A8（对照抗体），western blot 检测Sjp40 蛋白的表达； 制备肝脏石蜡切片，HE 染色观察肝脏虫卵肉芽肿的形成与发展，进一步以免疫荧光技术进行Sjp40 在肝脏沉积虫卵及其肉芽肿 组织中的定位。结果 日本血吸虫感染兔呈急性肝肉芽肿病变期的45 dpi 肝脏沉积虫卵中Sjp40 mRNA 水平显著高于29 dpi 尚 未形成虫卵肉芽肿结节的肝脏沉积的未成熟虫卵（P<0.05），westernb blot 证实了Sjp40 蛋白在29 dpi 和45 dpi 兔肝脏中的表 达。免疫荧光显示：Sjp40 在29 dpi兔肝脏中定位于未成熟虫卵内，而45 dpi 可见感染兔肝脏中沉积大量成簇内含毛蚴的成熟虫 卵及其周围肉芽肿组织均有明显荧光。结论 Sjp40 在日本血吸虫感染兔肝脏沉积虫卵中的转录水平随虫卵发育成熟而显著增 加，在感染兔急性肉芽肿病变期（45dpi）呈现由虫卵向其周围肉芽肿组织扩散现象，提示该分子在血吸虫肉芽肿形成与发展过 程中具有重要作用。 关键词：日本血吸虫；血吸虫病；SjP40 ；虫卵肉芽肿；免疫荧光定位 Expression profiling and immunofluorescence localization of the major egg antigen p40 of Schistosoma japonicum in the liver of infected New Zealand white rabbits XIA Dan, DENG Ganming, TENG Pingying, XIE Yu, LI Yaomin, WANG Chunmei, CHEN Shujie, CHEN Minfang, MAI Rongjia, LIAO Haiyan, SHI Lingyu, OU Liyan, CHEN Qiwei, CHEN Xiaoguang, ZHOU Xiaohong Key Laboratory of Prevention and Control for Emerging Infectious Diseases of Guangdong Higher Institutes, Department of Pathogen Biology, School of Public Health and Tropical Medicine, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China Abstract: Objective To examine the expression profile and immunofluorescence localization of the major egg antigen p40 of Schistosoma japonicum (Sjp40) during granuloma formation in the liver of infected New Zealand white rabbits. Methods New Zea