八分子生物学研究方法.ppt

第四节 分子杂交技术 片段扩增倍数 （二）重组DNA的转化 1、转化 指以细菌质粒为载体，将外源基因导入受体细胞的过程。转化时，细菌必须经过适当的处理使之处于感受态－即容易接受外源DNA的状态，然后利用短暂热休克使DNA导入细菌宿主中。 此外还可用电穿孔法转化细菌，它的优点是操作简便、转化效率高、适用于任何菌株。 （1）将快速生长中的大肠杆菌置于经低温（0℃）预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀（形成原生质球）。 步骤： （2）与转化混合物中的外源DNA形成粘附在细胞表面的复合物。 （3）立即将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激，复合物便会被细胞所吸收。 （5）涂布于选择性培养基中分离转化子。 （4）在全培养基中生长一段时间使转化基因实现表达、细胞活性恢复 2、转染和感染 感染：在体外将噬菌体DNA包装成病毒颗粒，然后使其感染受体菌。 转染：在DNA连接酶作用下使噬菌体DNA环化，再象重组质粒一样地转化进受体菌。但习惯上常把以噬菌体DNA为载体构建成的重组子导入细胞的过程统称为转染。 （一）抗药性标志的筛选 （二）β－半乳糖苷酶系统筛选 （三）菌落快速裂解鉴定法 （四）内切酶图谱鉴定 （五）通过聚合酶链反应筛选重组子 （六）菌落或噬菌斑原位杂交 六、重组质粒的筛选和鉴定 杂交(hybridization) ：来源不同的两条彼此的链重新缔合成为双螺旋