高二生物第14课时5.3血红蛋白的提取和分离.pptVIP

凝胶色谱法分离蛋白质的原理 磁力搅拌器 搅拌器正在工作 分离血红蛋白溶液 利用透析袋透析 装配好的凝胶柱 开始进行层析 收集得到的纯化后的蛋白 纯化－－凝胶色谱操作 1.凝胶色谱柱的制作： 2.凝胶色谱柱的装填： 教材图5－19 3.样品的加入和洗脱 1、凝胶色谱柱的制作 ①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。 ②底塞的制作：打孔 挖出凹穴 安装移液管头部 覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。 a、选择合适的的橡皮塞，中间打孔； b、在橡皮塞顶部切出锅底状的凹穴，在0.5ml的移液管头部切下5cm长的一段，插入橡皮塞孔内，上部不得超过橡皮塞的凹穴底面。 底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。 注意 c.剪尼龙网小圆片覆盖在橡皮塞的凹面上，用100目的尼龙纱将橡皮塞上部包好，插到玻璃管一端。 d、色谱柱下端用移液管头部做出口部位，连接一细的尼龙管，并用螺旋夹控制尼龙管的打开与关闭，另一端放入收集色谱流出液的收集器内 ⑤安装其他附属结构。 ③顶塞的制作： 插入安装了玻璃管的橡皮塞 ④组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体。 凝胶色谱柱填料的处理 （1）凝胶的选择： （ ）（G-75） “G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度