总RNA提取及免疫组化幻灯片.pptVIP

细胞总RNA的提取 RNA纯度的判断 280、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、盐浓度和蛋白等有机物的值 A260/A280 1.8—2.0 ＜1.8表明有蛋白质、苯酚的污染 ＞2.2表明RNA已经水解成单核酸 A260/A230 2.0 ＜2.0表明酚盐离子，硫氰酸盐或其他有机化合物污染 免疫组化的原理及流程介绍 免疫组化原理及流程介绍 主要内容 免疫组化原理及流程介绍 三 免疫组化的基本流程 免疫组化原理及流程介绍 1)用封闭通透液浸润切片 30 min（RT 避光）。 其配法是用预热 40 ml PBS 加120ul TritonX-100 加热几分钟，在临用前加 400 ul的30％H2O2。 2)PBS 溶液洗 3 次×3 min。 免疫组化原理及流程介绍 将切片取出,周围水分用滤纸吸干,用组化笔在组织周围画上圈,在圆圈内组织滴入 5%羊血清（与二抗来源一致）后放入湿盒中,室温 (约30℃)下10～30min。 免疫组化原理及流程介绍 一抗孵育条件在免疫组化反应中最重要，包括孵育时间和抗体浓度。 一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，然后4度过夜和从冰箱拿出后37度复温45min。具体条件