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东胜创新 东胜创新 东胜创新生物科技有限公司 东胜创新 定量与常规PCR的差别 Opticon实时荧光定量PCR仪之 常规PCR技术： 对PCR扩增反应的终产物进行定量及定性分析 定量PCR技术： 通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析 三个关键词：实时，定量，荧光 Opticon实时荧光定量PCR仪之 如何定量？ Ct值的概念 Ct值的定义是PCR扩增过程中，荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的阈值所对应的循环次数。 为什么要用Ct值定量 实时荧光定量PCR方法利用循环阈值（Ct）的概念，在指数扩增的开始阶段进行检测，此时样品间的细小误差尚未放大，因此该Ct值具有极好的重复性。 定量原理 初始 DNA量越多, 荧光达到某一值（域值）时所需要的循环数越少 Log浓度与循环数呈线性关系，根据样品扩增达到域值的循环数就可计算出样品中所含的模板量 确定初始模板的浓度 Opticon实时荧光定量PCR仪之 SYBR Green 1 Molecular Beacons TaqMan 荧光化学 Opticon实时荧光定量PCR仪之 Amplifluor Roche 荧光化学 Opticon实时荧光定量PCR仪之 阴阳探针 R1 R2 R Q SYBR Green I 工作原理 Opticon实时荧光定量PCR仪之