精选实验九 new 微丝的观察-鬼笔环肽标记.pptVIP

实验九 动物细胞内微丝结构的观察 （鬼笔环肽标记法） * 实验目的 1. 了解鬼笔环肽标记微丝结构的原理。 2 观察微丝束（应力纤维）在动物细胞内的分布。 3 学习细胞固定，穿透，染色等技术。 4 巩固荧光显微镜的使用技术。 * 实验原理 Actin-Tracker Green是一种Actin绿色荧光探针，可以用于培养细胞或组织切片的Actin特异性荧光染色。 ?? Actin-Tracker Green探针为荧光染料FITC标记的毒蕈肽(phalloidin)，即phalloidin-FITC，其分子量约为1251.4，最大激发波长为496nm，最大发射波长为516nm。 可以用于细胞或组织内的微丝(microfilament)的荧光检测。 ?? 使用时的推荐稀释比例为1:200。如果每个片子需要使用200μl染色工作液，每个包装的本产品足够用于200个片子 的染色。 * 主要仪器与溶液 主要仪器 荧光显微镜、移液器（1000ul 和100ul) 材料：细胞爬片，两人一孔。 溶液 PBS配制的3.7%甲醛溶液。 0.1% Triton X-100的PBS洗涤液 含有5%BSA和0.1% Triton X-100的PBS按照1:200的比例稀释Actin-Tracker Green * 实验步骤 a 用PBS洗涤细胞或组织切片2次。每次0.4ml. b.弃去洗涤液，用PB