ELSD应用心得.ppt

蒸发光散射检测器（ELSD）应用心得 陆小冬 Email：lxdongzi2003@ ELSD应用心得 自2001年六月开始使用ELSD起，至今已有近五年的时间了；现将这五年来的经验与教训总结归类，来与大家一起分享。 这几年我主要是用的法国Eurosep公司的DDL31型ELSD。 ELSD应用心得 样品部分 HPLC部分 ELSD仪器部分 结果处理部分 仪器故障诊断 ELSD的优点与缺陷 一、样品部分 样品的特性之一：挥发性 样品的基本结构 样品的预处理 样品的溶剂 样品的上样量 一、样品部分（挥发性） 样品的挥发性是ELSD要考虑的重点问题。 对于挥发性的或半挥发性的检品（如脂类），最好使用部分检品进入检测池类型ELSD（也称：气溶胶分流型），这样可以使用较低蒸发温度，降低检品自身的挥发。 对于非挥发性的检品（如氨基酸），最好使用全部检品进入检测池类型ELSD（也称：非气溶胶分流型），这样可以增加蒸发后颗粒数目，从而提高灵敏度。 一、样品部分（基本结构） 在同一类型的检品（如PEG5000与20000）中，高分子量，需要高温度蒸发，才能得到好的信号响应。 而特别是在低浓度时（与样品尺寸大小相关），分子量的大小决定信号响应因子。 对于结构类似、分子量差异不大的不同物质，其信号响应因子基本相同（这就是响应因子一致性），这就决定了ELSD可以定量计算未知样品的含量。 一、样品部分（预处理1） 如果样品无需预处理，可以直接上样或溶解后直接分析的，就用流动相去溶解或稀释。 一般的样品均需要预处理，如果需要萃取时，要注意萃取液中不挥发性物质在最终色谱分析中的干扰；最好让干扰远离检品峰，以便定性或定量。 一、样品处理部分（预处理2） 由于选择ELSD作为检测器，是用于痕量分析中，多数时需要对样品或预处理中的萃取液进行浓缩，这时需要考虑溶液中痕量干扰物。如塑料制品中的增塑剂，在多数萃取时使用氯仿类的萃取液时，会溶解增塑剂，如果直接上色谱分析时，ELSD不会明显显现，一旦进行浓缩后，会把不到1ppm的增塑剂变成10ppm，甚至更大，可以被ELSD检出。 一、样品部分（溶剂） 样品溶剂的沸点希望较低，这样有利于ELSD的使用。 样品溶剂符合一般HPLC分析要求即可。 尽可能用分析启始流动相去溶解或稀释样品。 一、样品部分（上样量） 样品上样量主要与所要分析的等级有关，够用最重要，至于是否达到100ppm级还是1ppm，不重要，重要的是否可以用于定性分析或定量计算。 少量样品时，信号响应因子主要与液滴尺寸大小相关；大量样品时，信号响应因子主要与液滴中的溶质浓度相关 ；这只会影响标准曲线方程的形式，不会影响计算。 二、HPLC部分 流动相 泵 色谱柱 柱外效应 流速 二、HPLC部分（流动相） 基本要求：挥发性为比样品大。 常用的试剂，有易挥发的有机溶剂、挥发性酸（硝酸、盐酸、碳酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸）、挥发性碱（氨水、三乙胺或乙二胺）、可降解挥发的盐（如碳酸氢铵等）、少量的水 。 不挥发性盐不易用于ELSD ；但并不是完全不能用，只是在使用时会损失灵敏度（由于噪音基线的增加所引起的必然结果）。 二、HPLC部分（流动相） 试剂纯度：除要求符合HPLC分析外，还要求含尽可能低的不挥发杂质，特别是水中的有机物杂质。 如果流动相组成沸点较高，那就需要较高的蒸发温度，才能达到较好的基线。 二、HPLC部分（流动相） 可以使用梯度分析；在用梯度分析时，调整必要的参数，可以使基线改变不敏感。 改变流动相组成将会改变信号响应因子：特别是在梯度分析样品时，要预先将各个不同比例的流动相的基线调成一致，（一般是通过蒸发温度来控制的）。 二、HPLC部分（流动相） 我曾用过的作为流动相的溶剂： 正相色谱中，氯仿/甲醇/二氯甲烷/正己烷/异丙醇为主，添加一定量的水、氨水、三乙胺、乙二胺、乙酸； 反相色谱中，乙腈/甲醇/二氯甲烷/水为主，添加一定量的三氟乙酸、硝酸、甲酸； 凝胶色谱中，乙醇/水为主，添加一定量的碳酸氢铵、碳酸铵； 离子色谱中，水为主，添加一定量的碳酸氢铵、碳酸铵，少量的Tris盐。 二、HPLC部分（泵） 最好采用低脉冲输液泵。 采用多元流动相时尤其注意梯度比例阀的精度和重现性。 如果能用高压梯度泵，效果会更好。 由于用ELSD作为检测器时，多用有机溶剂，在更换流动相时，一定要注意流动相之间的互溶性问题。（如乙腈与正己烷是不互溶的。） 二、HPLC部分（色谱柱） 通用的HPLC色谱柱均可以使用。 如果采用微径柱，可以提高信噪比。 由于流动相选择的局限性，可以在选择色谱柱时加以弥补。 在使用反相等键合柱时，特别要注意防止键合相的脱落引起的鬼峰。 在使用硅胶柱时，同样要注意防止硅胶的流失，从而带来鬼峰。 二、HPLC部分（柱外效应） 从色谱柱到ELSD之间